Desarrollo de una plataforma biolística de transformación estable para el estudio de la apomixis en Paspalum notatum

MANCINI M; WOITOVICH N; PERMINGEAT, HR; ORTIZ, JPA; QUARIN CL; PESSINO SC; FELITTI, S

Corrientes

Congreso; XL Congreso Argentino de Genética; 2011

Sociedad Argentina de Genética

Nuestro grupo de investigación identificó varios genes posiblemente asociados con la apomixis en Paspalum notatum. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una plataforma de transformación genética para la especie, a fin de realizar estudios funcionales modificando la expresión de estos genes en órganos reproductivos de plantas apomícticas y sexuales. En los experimentos de cultivo in vitro se ensayaron 3 tipos de explantos: semillas maduras, embriones maduros y meristemas. Los porcentajes de regeneración obtenidos fueron 47%, 20% y 46%, respectivamente. Los experimentos de transformación transiente fueron realizados sobre callos de semillas maduras utilizando un acelerador de partículas de tungsteno y presiones de helio de 600, 800 y 1100 psi. Los vectores de transformación incluyeron como genes reporteros al gen de síntesis de antocianinas de maíz y a GFP, ambos clonados bajo el promotor acticna de arroz (act1). El número de células transformadas/100 callos fue de 86 y 105 para antocianinas y GFP, respectivamente. A partir de curvas de selección para glufosinato de amonio y kanamicina se eligieron concentraciones de 1 mg/l y 50 mg/l, respectivamente para la etapa de selección de transformantes. Los experimentos de transformación estable se realizaron utilizando presiones de 800 psi y construcciones en horquilla conteniendo el gen N46 (MAP3K), junto al selector bar (tolerancia a glufosinato de amonio), ambos bajo el promotor act1. El porcentaje de regeneración fue de 16 plantas /100 callos bombardeados. Actualmente está en evaluación mediante experimentos de PCR y de hibridación Southern la introducción estable de los transgenes en el genoma de P. notatum.