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Dado que el diafragma se compone de fibras tipo I de gran resistencia al estrés y alto umbral de agotamiento que le permite contraerse unas 20 veces/min durante toda la vida, los mioblastos diafragmáticos (MD) serían una opción más adecuada que los de otros músculos esqueléticos para terapias cardio-regenerativas. Nos propusimos aislar, cultivar y caracterizar MD ovinos, transducirlos con el gen de conexina 43 (cx43) para promover la conexión entre células, y crecerlos sobre diferentes andamios (?scaffolds?) para su aplicación sobre áreas infartadas en forma de láminas. Métodos: Se obtuvieron biopsias de diafragma ovino que se digirieron con colagenasa. Los MD extraídos se cultivaron sobre un feeder layer de macrófagos (FLM) autólogos activados, se caracterizaron con anticuerpos anti-desmina, α-actina sarcomérica, SERCA-2-ATPasa y Ki-67, y por expresión del gen miogénico myoD (RT-qPCR). Los MD se transdujeron con lentivirus portadores del gen de cx43 y de la proteína verde fluorescente (GFP), previa medición de la eficiencia de transducción (ET) de diversas multiplicidades de infección (MOI). Finalmente, se cultivaron los MD sobre scaffolds de pericardio bovino (PB; n=8), ácido poliláctico (PLLA; n=8), y matriz extracelular de vejiga de cerdo (ECM; n=8), y se midió la confluencia (C) a 4 días por un score de 0 a 5, siendo 0: 0%C, 1: 1-20%C, 2: 21-60%C, 3: 41-60%C, 4: 61-80%C y 5: 81-100%C. Resultados: Los MD crecieron satisfactoriamente sobre el FLM y fueron positivos para los anticuerpos probados y para el gen de myoD. Con MOI=100 se logró una ET de 70,8% y expresión evidente de Cx43. El score de C fue 0 en PB, 2,6±1,1 en ECM y 4,75±0,5 en PLLA, (p