INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ES FOSFOCOLINA RECEPTOR DE ALFA HEMOLISINA DE E.COLI ?
Autor/es:
R. VAZQUEZ; V. HERLAX
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Encuentro; Asociación de universidades del Grupo Montevideo; 2010
Resumen:
La toxina extracelular a-Hemolisina (HlyA), miembro representativo de la familia de toxinas designadas RTX (Repeats in Toxin), es un importante factor de virulencia producido por varias cepas patógenas de Escherichia coli. En particular, HlyA se ha relacionado con enfermedades extraintestinales como infecciones del tracto genitourinario, peritonitis, meningitis y septicemia. La existencia de un receptor para HlyA en las membranas de las células diana es el punto de mayor controversia hasta la fecha. Aunque en membranas lipídicas puras la toxina es activa, se han encontrado receptores en las membranas de algunas células blanco, siendo glicoforina el receptor caracterizado en eritrocitos. Por lo anteriormente expuesto el objetivo de este trabajo es estudiar el mecanismo de acción de HlyA, empleando eritrocitos que difieren en composición lipídica y proteica. Utilizamos eritrocitos de caballo, carnero y conejo porque: los eritrocitos de caballo  poseen glicoforina y los de conejo carecen del mismo. Los eritrocitos de carnero, poseen un alto contenido de esfingomielina en sus membranas, y además no se ha descripto la presencia de glicoforina en estos. Para lograr este objetivo, se determinó el porcentaje de hemólisis de HlyA utilizando las tres especies de eritrocitos. Además se determino el porcentaje de unión de la toxina a los eritrocitos por fluorescencia, utilizando proteína marcada con Alexa 488. Se analizó la composición lipídica de las membranas de los eritrocitos por HPTLC. Y se realizaron estudios de inhibición de hemólisis por fosfocolina. Los resultados muestran que los eritrocitos de conejo son los más susceptibles seguido por los de caballo, siendo los más resistentes los de carnero. El porcentaje de unión de la toxina es similar para los tres eritrocitos, demostrando que la diferencia en la susceptibilidad no se debe a que se unan distinto a la membrana. La hemólisis es inhibida por fosfocolina en las tres especies, pero la inhibición es mayor en los eritrocitos de carnero. Teniendo en cuenta que las membranas de carnero no contienen fosfatidilcolina, la fosfocolina de la cabeza polar de la esfingomielina actuaría como receptor para HlyA. Podríamos concluir que en aquellos eritrocitos que carecen de glicoforina, como carnero y conejo, el receptor es la fosfocolina de la esfingomielina. La toxina necesita que fosfocolina este concentrada, por eso interacciona con los microdominios de membrana, como se demostró anteriormente. La relación esfingomielina colesterol juega un rol importante en la fluidez de la membrana, favoreciendo de esta manera la difusión de los pre- poros para formar el poro lítico. Conejo presentaría la mejor relación que favorecería esta difusión.