Búsqueda de compuestos naturales con potencial terapéutico para la prevención y tratamiento de la aterosclerosis: evaluación del efecto de aceites esenciales sobre el metabolismo lipídico.

OTERO C; MONTERO VILLEGAS S; CRESPO R; DUMRAUF B; VIÑA S; CASTRO A; RODENAK KLADNIEW B; GARCÍA DE BRAVO M

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2019; 2019

Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata

Introducción: La aterosclerosis es una enfermedad cardiovascular caracterizada por la acumulación de lípidos principalmente colesterol (Col) en las paredes de las arterias, seguido por un progresivo deterioro y reducción del flujo sanguíneo debido a un exacerbado proceso inflamatorio producido por macrófagos y células espumosas. En el hígado, los niveles de Col pueden regularse por diversos mecanismos, entre los que se encuentra la síntesis de novo de Col o vía del mevalonato (VM). En las primeras etapas de la VM (reacciones pre-escualeno) se generan isoprenoides no esteroideos como ubiquinona, dolicol y grupos prenilos. La enzima lanosterol sintasa (LSS) es quien cataliza la reacción de ciclación del escualeno para formar lanosterol que es el primer componente cíclico de la VM del cual derivan todos los esteroides. La inhibición de la LSS representa un blanco terapéutico muy prometedor como agente hipocolesterolemiante debido a que interviene en una reacción post-escualeno lo que implicaría inhibir la síntesis de Col sin afectar la de moléculas no esteroideas muy importantes para la célula. Los aceites esenciales (AEs) de frutos cítricos y plantas aromáticas han sido ampliamente estudiados debido a sus propiedades antioxidantes e hipocolesterogénicas.Objetivos: Analizar los efectos de AEs en el metabolismo del Col a través de la VM, y su acumulación intracelular, en búsqueda de aquellos AEs de plantas de producción local que muestren el mayor potencial para prevenir o disminuir el proceso aterogénico.Materiales y métodos: Una línea celular proveniente de un hepatocarcinoma humano (HepG2) y células espumosas derivadas de una línea de monocitos procedentes de una leucemia monocítica aguda humana (THP-1) fueron tratados con AEs de Citrus reticulata, Lippia alba (quimiotipos tagetenona, linalool y dihidrocarvona), Melissa calaminta, Eucalyptus globulus, Mentha x piperitha y Origanum x applii, y con D-limoneno y 1,8-cineole (componentes de los AEs). Se utilizó el ensayo de MTT para determinar las concentraciones con las cuales se tratarían los cultivos celulares.La síntesis de Col fue determinada por incorporación de [14C] Acetato en células HepG2, y Ro 48-8071 fue utilizado como inhibidor de la enzima LSS. Los lípidos fueron extraídos con una mezcla de hexano: isopropanol, cuantificados en contador de centelleo, separados por TLC y revelados en equipo Storm.Los monocitos THP-1 se diferenciaron a macrófagos mediante la incubación con palmitoil-miristoil forbol (5 ng/mL) durante 24 hs y los macrófagos fueron luego incubados con 40 μg/mL de LDL oxidadas durante 72 hs para establecer el modelo de células espumosas. Las mismas fueron cultivadas en monocapa (modelo bidimensional o 2D) y como esferoides (modelo tridimensional o 3D). Para la formación de esferoides se empleó el método de hanging drop. En células espumosas, el contenido de gotas lipídicas se cuantificó espectrofotométricamente por tinción con Oil Red O, y el Col total y triacilglicéridos (TAG) con kits comerciales.Resultados: Los resultados muestran que en células hepáticas, los AEs de C. reticulata y L. alba disminuyen la incorporación de [14C] Acetato en lanosterol y Col, lo cual sugiere la inhibición de LSS y/o escualeno sintasa de la VM. La incorporación de [14C] Acetato en escualeno es variable, pero siempre aumenta en células incubadas con sus componentes mayoritarios, D-limoneno y 1,8-cineole, lo que indica la inhibición de LSS. En todos los casos, se incrementan los niveles de 2,3-oxidoescualeno y/o ubiquinona. Las células espumosas en monocapa muestran diferentes valores de IC50 de viabilidad celular al ser tratadas con los AEs, y el valor más bajo se obtuvo con M. calamintha (IC50=130 µL/L). Las células espumosas muestran variabilidad en el contenido de las gotas de lípidos, así como también en el contenido de Col y TAG al tratar con los diversos AEs. Los ensayos preliminares realizados en células de espumosas en el modelo de cultivo 3D sugieren resultados similares.Conclusiones: Los AEs de especies de plantas bien adaptadas a las condiciones locales disminuyen la síntesis de Col en células hepáticas por inhibición de LSS, sin disminuir isoprenoides esenciales tales como ubiquinona, y reducen la acumulación de Col en células espumosas. Estos resultados sugieren que estos AEs tienen un gran potencial como fármacos naturales contra la aterosclerogénesis.