INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudios con Apolipoproteína AI marcada con pireno: Un análisis multiparamétrico de la sonda fluorescente pireno maleimida.
Autor/es:
TÁRRAGA WA; GONZALEZ MC; GARDA HA; FALOMIR LOCKHART LJ
Lugar:
La Plata
Reunión:
Jornada; Jornada de Investigación 2019 de la Facultad de Ciencias Médicas de La Plata; 2019
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Médicas de La Plata
Resumen:
Introducción:Apolipoproteína AI (Apo AI) es la proteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL, por sus siglas en inglés) con propiedades antiaterogénicas que son atribuidas a su rol en el transporte reverso del exceso de colesterol desde los tejidos periféricos hacia el hígado para su catabolismo y excreción.Apo AI se compone de varias hélices alfa anfipáticas. En solución acuosa, ellas conforman un ramillete con estructura terciaria y cuaternaria pobremente caracterizadas. Dependiendo de la concentración, apo AI se autoasocia para formar dímeros y oligómeros de orden superior, a través de un mecanismo que requiere mayor investigación. También, apo AI interacciona con fosfolípidos para formar HDL discoidales (dHDL, por sus siglas en inglés) con distintos arreglos estructurales antiparalelos que se distinguen entre sí por la proximidad entre sus hélices.Objetivos:El objetivo del presente trabajo es obtener información sobre la autoasociación de apo AI en solución, especialmente estudiando la proximidad entre hélices 4, 5 y 10, lo cual es importante para entender el mecanismo de generación de dHDL.Materiales y métodos:Seis mutantes de cisteína (K107C, K133C F104C, L137C, K226C y F225C) fueron específicamente diseñadas y marcadas con pirenil maleimida en las posiciones correspondientes a las caras hidrofílicas e hidrofóbicas de las hélices 4, 5 y 10. Las fluorescencias del monómero y excímero en proteínas marcadas fueron registradas en función de la concentración total de la proteína y varios modelos matemáticos fueron desarrollados y comparados para evaluar distintos tipos de asociación y calcular constantes de asociación (Kas) correspondientes a los distintos eventos de oligomerización propuestos.Resultados:Las mutantes marcadas fueron estables en solución, como lo indicó su fluorescencia de triptófano. Con la excepción de F104C, el resto de las mutantes fueron biológicamente activas ya que pudieron interactuar con fosfolípidos para formar dHDL. Los espectros de emisión de fluorescencia de pireno mostraron formación de excímeros solo en el caso de las mutantes F225C, K133C y K226C, destacando la participación de las hélices 5 y 10 en las regiones de contacto durante ciertas etapas de la oligomerización. Los cambios en pValue de la emisión de monómero, también informaron sobre cambios conformacionales durante la oligomerización. En el caso de K133C, se predijeron al menos dos eventos diferentes de asociación, y un modelo de asociación progresiva que fue el más adecuado para representar este comportamiento.Conclusiones:En conjunto, estos resultados sugieren que las auto-proximidades de las hélices 5 y 10 son necesarias para formar dHDL y estarían presentes en conformaciones solubles de apo AI en solución.