Aceite de cáscara de Citrus reticulata con potencial terapéuticos para el tratamiento de la aterosclerosis: estudios bioquímicos, moleculares y bioinformáticos

CASTRO M; GAVERNET L; LLANOS M; GARCÍA DE BRAVO M; RODENAK KLADNIEW B; CRESPO R

Mendoza

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas 2019; 2019

Universidad Nacional de Cuyo

Introducción: La aterosclerosis es una enfermedad cardiovascular (ECV) caracterizada porun engrosamiento de las paredes arteriales debido al depósito de lípidos principalmente elcolesterol (Col) y a una respuesta inflamatoria crónica promovida por macrófagos y célulasespumosas. Las ECVs son la principal causa de muerte y discapacidad a nivel mundialsiendo la hipercolesterolemia el factor que contribuye al 56% de los casos de cardiopatíacoronaria. Los niveles de Col plasmático se regulan por mecanismos como la síntesis denovo del Col o vía del mevalonato (VM) principalmente activa en hepatocitos. En lasprimeras etapas de la VM (reacciones pre-escualeno) se generan isoprenoides noesteroideos como ubiquinona, dolicol y grupos prenilos. La enzima lanosterol sintasa (LSS)es quien cataliza la reacción de ciclación del escualeno para formar lanosterol que es elprimer componente cíclico de la VM del cual derivan todos los esteroides. La inhibición dela LSS representa un blanco terapéutico muy prometedor como agentehipocolesterolemiante debido a que interviene en una reacción post-escualeno lo queimplicaría inhibir la síntesis de Col sin afectar la de moléculas no esteroideas. Por otro lado,los macrófagos participan activamente en la formación de la lesión aterosclerótica a travésde la interacción de sus receptores escavenger CD36 con LDLoxidadas. El aceite de cáscarade mandarina (ACM) Citrus reticulata está constituido por compuestos naturales (GRAS),con potencial actividad hipocolesterolemiante y antiaterogénica.Objetivo general: Evaluar el efecto del ACM sobre el metabolismo lipídico en líneascelulares hepáticas y macrófagos, así como el efecto antioxidante sobre LDLs paraencontrar nuevos blancos terapéuticos antiaterogénicos de baja toxicidad.Métodos: Se utilizaron concentraciones de 0-100 μL/L de ACM y su componentemayoritario el limoneno (Li) en células HepG2 y Raw 264.7. Las HepG2 fueron incubadaslas últimas 3 hs de tratamiento con 14C-acetato. Los lípidos fueron extraídos por el métodode Folch, separados e identificados por TLC, cuantificados en contador de radiactividad yanalizados en equipo Storm. Las Raw 264.7 se diferenciaron de macrófagos a célulasespumosas incubando 8 hs con LDLox (50 μg/mL). El contenido lipídico teñido con Oil-Red-Oil se analizó por microscopía y espectrofotometría. La expresión del receptor CD36se cuantificó por RT-qPCR. Los componentes del ACM fueron sometidos a simulacionesde docking molecular para proponer un modo de interacción con la LSS utilizando unaestructura cristalográfica obtenida del Protein Data Bank. La metodología se validó con elestudio de inhibidores reportados. Se realizaron simulaciones de dinámica molecular de loscandidatos en el sitio de unión.Resultados: Se observó que concentraciones menores a 60 μL/L del ACM y Li en lascélulas hepáticas inhiben la síntesis de Col pero incrementan los niveles de incorporaciónde 14C-acetato en productos de reacciones pre-escualeno como la ubiquinona y escualeno.En células espumosas disminuyen los depósitos de lípidos intracelulares y la expresión dereceptores CD36. Mayores concentraciones del ACM mostraron una disminución en la incorporación del 14C-acetato en Col y en todos los intermediarios de la VM detectados, asícomo en distintos glicerolípidos neutros y polares. Los depósitos de lípidos en las célulasespumosas disminuyeron significativamente. Las simulaciones computacionales muestranque el Li y algunos componentes minoritarios del ACM podrían interaccionar con la LSSen una región cercana al sitio catalítico.Conclusiones: El ACM disminuye la síntesis de Col y los depósitos de lípidos intracelularessugiriendo una inhibición de la enzima LSS, lo que se complementa con las simulacionescomputacionales. Estos resultados constituyen evidencias muy alentadoras para avanzarcon la validación del ACM como inhibidor de la LSS, potencial blanco terapéutico para laprevención y/o tratamiento de la aterosclerosis.