Efectos de alfa-hemolisina de Escherichia coli sobre membranas corioamnióticas humanas

PUCCI MOLINERIS, M; BARBERO, H; PELINSKY, P; HERLAX V; ACCIALINI, P; FARINA, M

Jornada; III Jornadas Interdisciplinarias del Hospital Español; 2019

Las infecciones urinarias bacterianas constituyen la patología infecciosa más frecuente en mujeres embarazadas. Estas pueden cursar en ausencia de síntomas (asintomáticas) y aun así causar graves consecuencias tanto en la madre como en el feto. Ha sido reportada la incidencia de las infecciones urinarias en la restricción del crecimiento intrauterino, el bajo peso al nacer, la preclampsia, las infecciones sistémicas en la madre, en el desencadenamiento de parto prematuro (previo a las 37 semanas de gestación) y abortos espontáneos. El agente etiológico aislado en más del 80% de los casos es Escherichia coli (E.coli) uropatogénica. Uno de los factores de virulencia más importantes expresado por estas cepas es la alfa hemolisina (HlyA), una exotoxina de origen proteico con capacidad de inducir la lisis de las células blanco mediante la formación de poros. Recientemente, se ha demostrado que E.coli participa en la ruptura prematura de membranas corioamnióticas, evento del cual depende que se desencadene el parto prematuro. Aquí, nos propusimos profundizar en el conocimiento de los mecanismos de infección de las cepas uropatogénicas de E.coli mediados por alfa hemolisina e investigar el efecto protector de anticuerpos anti-HlyA sobre membranas fetales.Para esto, se obtuvieron membranas corioamnióticas de mujeres con indicación de cesárea, de más de 37 semanas de gestación, sin trabajo de parto activo ni antecedentes o evidencia de infección. Las membranas fueron cortadas y colocadas sobre un Transwell y sujetadas por una hebra de lino estéril generándose dos cámaras independientes. Para simular una infección urinaria ascendente, las membranas fueron incubadas (37°C, 5% CO2, 24hs) en condiciones control, con HlyA 5nM/50nM o con ProHlyA 50nM (forma inactiva) en la cámara del corion. Luego, evaluamos la integridad de la membrana en secciones de tejido y los niveles de colágeno con la tinción H-E y el tricrómico de Masson, respectivamente (n=8). También, se analizó la actividad de metaloproteasas (MMP) por zimografía y la a expresión del gen de la ciclooxigenasa 2 (COX2) por qPCR. Conforme la concentración de HlyA aumenta, se observó una alteración de la estructura de la membrana y disminución del contenido de colágeno con respecto al grupo control. Consistentemente, se detectó un aumento en la expresión de COX2 (involucrada en la síntesis de prostaglandinas) y una actividad metaloproteasa diferencial. El grupo Pro-HlyA, mostró un comportamiento similar al grupo control.La toxina HlyA secretada por E.coli puede, por sí misma, desatar eventos relacionados con el remodelado de la matriz extracelular de membranas corioamnióticas in vitro. Estos hallazgos sugieren que el bloqueo de HlyA podría contribuir a aminorar los daños producidos sobre las membranas fetales.