A LA RECHERCHE DU RECEPTEUR POUR L?ALPHA-HEMOLYSINE DANS LA MEMBRANE DU GLOBULE ROUGE

SANDRINE GENETET; LUCIA CANE; MARIANO A. OSTUNI; CLAUDE HATTAB; VANESA HERLAX; ISABELLE MOURO-CHANTELOUP; ALEXANDRA DESRAMES; PABLO J SCHWARZBAUM

Congreso; Congrès du Club du Globule Rouge et du Fer; 2019

L´alpha hémolysine (HlyA) est une protéine hémolytique et cytotoxique sécrétée par des souches uropathogènes d´E. coli. HlyA agit sur plusieurs types de cellulaires de différentes espèces, y compris les globules rouges humains (RBC). Elle est aussi capable, à fortes concentrations, d?induire une disruption de liposomes artificielles. Différentes équipes ont exploré la liaison de HlyA aux membranes cellulaires et essayé de caractériser un récepteur putatif spécifique de la toxine. Cependant les résultats obtenus sont assez contradictoires. En ce qui concerne les globules rouges, les glycophorines ont été proposées en tant que récepteurs présumés dans les globules rouges du cheval, bien que d´autres études aient indiqué que la liaison de HlyA aux globules rouges du lapin se produisait de manière non saturable et que la toxine n´interagissait pas avec un récepteur de protéine spécifique. Par ailleurs, nous avons précédemment démontré que HlyA induit une diminution de la déformabilité des globules rouges humains et la libération d´ATP lytique et non lytique, effets potentiellement liés à l´interaction de la toxine avec la glycophorine.Dans ce contexte, le but de notre étude était de déterminer si l?interaction de HlyA avec les glycophorines des érythrocytes humains était une étape clé dans les effets hémolytiques de la toxine. À cette fin, nous avons mesuré l´activité hémolytique de HlyA sur des globules rouges prétraités avec différents anticorps ciblant les glycophorines (iH4 (nanoanticorps contre Y52PPE55), anti-GPA / GPB, anti-GPA) et sur des globules rouges GPA-/-/ GPB-/-. À notre grande surprise, l´activité hémolytique de la toxine était similaire à celle des globules rouges témoins dans toutes les conditions testées, ce qui indique que les glycophorines A et B ne sont pas nécessaires pour l´activité lytique de HlyA. De plus, étant donné que la GPA est associée à la Bande 3 au sein des complexes protéiques de la membrane des globules rouges, nous avons effectué des tests de cytométrie en flux en utilisant des anticorps anti-GPA (R18) et anti-Bande 3 (Bric6 et anti-Diego b) ainsi qu?un anticorps dirigé contre un épitope composite Wr (anti-Bande3/GPA, Bric14), sur des hématies traitées et non traitées avec la toxine. Les résultats ont montré une légère augmentation de l´intensité de fluorescence lorsque la toxine interagit avec les globules rouges, indiquant des modifications conformationnelles de la GPA et de la Bande 3 dans ces conditions ou une meilleure accessibilité des antigènes suite au gonflement généré par la toxine. En conclusion, les résultats indiquent que l´interaction HlyA-GPA ou GPB n´est pas crucial pour l´activité lytique de HlyA.