INIBIOLP 05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Búsqueda de un receptor para alfa-hemolisina de E. Coli en la membrana de glóbulos rojos humanos
Autor/es:
CANÉ L; HATTAB C; HERLAX V; GENETET S; OSTUNI MA; DESRAMES A; SCHWARZBAUM PJ
Lugar:
La Plata
Reunión:
Jornada; Jornadas de Investigación 2019; 2019
Institución organizadora:
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA - Facultad de Ciencias Médicas
Resumen:
Introducción: Alfa-hemolisina (HlyA) es una proteína hemolítica y citotóxica secretada por cepas uropatogénicas de E. coli. HlyA actúa en variedad de tipos celulares de diversas especies, incluyendo glóbulos rojos humanos (GRh); así como también se une y desorganiza liposomas libres de proteínas. Estudios que exploraron la unión de HlyA a membranas y la caracterización de un posible receptor específico de la toxina dieron resultados contradictorios. En GR de caballo glicoforina fue caracterizada como un posible receptor, mientras que en GR de conejo encontraron que la unión de HlyA no llega a saturarse, indicando que la toxina no interactúa con un receptor específico. Por otro lado, previamente demostramos que HlyA produce una disminución en la deformabilidad de los GRh, y liberación de ATP lítico y no lítico, efectos asociados a la interacción de ligandos con glicoforina.Objetivos: En este contexto, el objetivo del trabajo fue caracterizar si la interacción de HlyA con glicoforinas humanas media los efectos hemolíticos y sublíticos de la toxina.Materiales y métodos: Medimos la actividad hemolítica de HlyA en GRh pretratados con diferentes anticuerpos (iH4 (nanoanticuerpo contra Y52PPE55), anti-GPA/GPB, anti-GPA) y en GRh GPA-/-/GPB-/-. También realizamos ensayos de citometría en GRh no tratados y tratados con HlyA, utilizando anticuerpos anti-GPA(R18) y anti-banda3 complejada con glicoforina (Wr). Resultados: Para nuestra sorpresa la actividad hemolítica de la toxina fue similar al control en GRh pretratados con diferentes anticuerpos y en GRh GPA-/-/GPB-/-, indicando que glicoforina no es necesaria para la actividad lítica de la toxina. Los resultados de citometría mostraron un leve incremento en la intensidad de fluorescencia cuando la toxina interactúa con GRh, indicando que existen cambios conformacionales en GPA y Banda 3 en estas condiciones.Conclusiones: Los resultados indican que la interacción entre HlyA y GPA o GPB no es necesaria para la actividad lítica de la toxina.
