Estudio del gen RHBDD2 como modulador de genes del UPR frente al tratamiento con 5-Fu en células de cáncer colorrectal

GARCÍA-FABIANI, MB; GARCIA KA; ABBA MC; LACUNZA E; PALMA, S; SCAGLIA N

Junin

Congreso; I Congreso Multidisciplinario UNNOBA: Ciencia, Innovación y Sociedad; 2018

En estudios previosdeterminamos que RHBDD2 se halla sobrexpresado en estadios avanzados del cáncerde mama y del cáncer colorrectal (CCR); que se encuentra asociado a la vía biosintéticasecretora, principalmente a la vía UPR (del inglés: Unfolding Protein Response)y que en células de cáncer colorrectal su expresión se induce frente al agente quimioterápico5-Fluorouracilo (5-Fu). Se ha demostrado que la activación de la vía UPR confierequimiorresistencia a células tumorales. El objetivo del presente trabajo fueevaluar el efecto de la variación en la expresión de RHBDD2 sobre genes de lavía del UPR en células de CCR expuestas al 5-Fluorouracilo. Se empleó un constructo de sobrexpresión de RHBDD2 para transfectar la líneacelular Caco2 (baja expresión endógena de RHBDD2) y se utilizó un vectorlentiviral para silenciar a RHBDD2 en la línea HTC116 (alta expresión endógenade RHBDD2). Sobre estos sistemas se evaluaron los procesos de migración yproliferación celular mediante el ensayo de cierre de herida, el crecimientolibre de anclaje mediante el ensayo de formación de colonias en agar y el ciclocelular mediante citometría de flujo. Asimismo, se evaluó la expresión de unpanel de genes del UPR mediante real time PCR. La sobrexpresión de RHBDD2 aumentóla migración y la proliferación celular (p<0.05) mientras que su silenciamientocausó una disminución en ambos procesos (p<0.01). En células tratadas con5-Fu, el silenciamiento de RHBDD2 aumentó la susceptibilidad de las células altratamiento, mientras que su sobrexpresión les confirió una mayor viabilidad(p<0.05). En cuanto a los genes del UPR, la sobrexpresión de RHBDD2 aumentósignificativamente (p<0.01) la expresión de BIP, chaperona asociada a quimiorresistencia,mientras que el silenciamiento de RHBDD2 indujo una disminución en suexpresión. Por otro lado, CHOP, efector final de la vía UPR, asociado aapoptosis, se redujo ante la sobrexpresión de RHBDD2 y se elevó ante susilenciamiento. Estos resultados indican que RHBDD2 modularía la expresión degenes del UPR afectando la respuesta al tratamiento con 5-Fu en células de CCR