ESTUDIO FUNCIONAL DE PÉPTIDOS CON SECUENCIAS CRAC Y CARC DERIVADOS DE ALFA HEMOLISINA DE E. COLI

GUZMÁN F; MATÉ S; CANÉ L; HERLAX S

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2018; 2018

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA - Facultad de Ciencias Médicas

Alfa Hemolisina de Escherichia Coli (HlyA) es una proteína formadora de poros que pertenece a la familia RTX (Repeat in Toxins). A partir de datos experimentales y predicciones estructurales, se sintetizaron seis péptidos derivados de HlyA: PEP 1: un dominio transmembrana descripto como hemolíticamente activo; PEP 2: también un dominio transmembrana, cuya secuencia corresponde a un dominio de unión a colesterol (CARC); PEP3: similar a PEP2 pero con el residuo Y347 sustituido por una A; PEP4: similar a PEP2 pero con una secuencia CRAC (?cholesterol recognition/interaction amino acid consensus domain?); PEP5 y PEP6 corresponden a secuencias CARC localizadas cerca de los sitios de acilación. Objetivos: El objetivo de este trabajo fue estudiar la participación de dominios CRAC y CARC en la estabilización de los monómeros de HlyA en membranas por su interacción con el colesterol, evaluar el papel de Y347 en la interacción con membranas y finalmente encontrar un péptido activo para la construcción de una inmunotoxina. Materiales y métodos: Los péptidos fueron sintetizados por el método de síntesis peptídica en fase sólida (Estrategia Fmoc) y purificados por HPLC (columna C-18). La masa molecular se determinó por espectrometría de masas y la estructura peptídica por dicroísmo circular. La actividad hemolítica de los péptidos se midió usando eritrocitos humanos y los ensayos de inhibición de la actividad hemolítica se realizaron preincubando eritrocitos con péptidos y agregándoles la toxina. Resultados: Los resultados describen a PEP2 como hemolítico, lo que es prometedor y nos alienta a utilizarlo en el diseño de inmunotoxinas. PEP3 resultó no ser hemolítico, sugiriendo que el residuo Y347 es fundamental para la interacción de HlyA con membranas lipídicas. PEP4 resultó no ser hemolítico, lo que implica que la secuencia CRAC agregada es desfavorable para la actividad del péptido. PEP6 compite con HlyA por sitios de unión en eritrocitos.Conclusiones: En conclusión, sintetizamos y estudiamos la estructura y actividad de seis péptidos derivados de HlyA de Escherichia coli. También, encontramos un péptido que es hemolíticamente activo, lo que conduce a nuestro grupo al diseño y la construcción de una inmunotoxina.