INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Metabolismo lipídico en células tumorales: Rol de FABP5
Autor/es:
CÓRSICO B; GARCIA K; SCAGLIA N.
Lugar:
San Luis
Reunión:
Congreso; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas.; 2017
Resumen:
Introducción: Enlas células tumorales se observa una reprogramación de su metabolismo hacia lasíntesis de macromoléculas, necesarias para la duplicación celular. De hecho, la modulación de ciertasvías metabólicas parece ser una característica prácticamente universal delcáncer.Más aún, el metabolismo intermediario modula, a su vez, proteínas clave para laproliferación / supervivencia celular y la expresión génica.Estos hallazgos han reavivado el interés en el metabolismo celular comopartícipe necesario para la transformación celular y blanco terapéutico para elcáncer. Las proteínas queunen ácidos grasos (FABPs) son proteínas de bajo peso molecular 14-15kDa,citosólicas que unen ácidos grasos (FA) de cadena larga con alta afinidad. Seha estudiado su estructura, distribución tisular y su mecanismo detransferencia de ácidos grasos, sin embargo, su función aún está en discusión.La existencia de nueve FABPs y la presencia simultánea de más de una isoformaen un tejido sugiere que las mismas difieren en su función. Se propone quepodrían transportar FA a diferentes compartimentos celulares dirigiéndolos asíhacia su oxidación, utilización en síntesis de lípidos complejos y regulaciónde factores transcripcionales. FABP5, epidermal o de queratinocito, presentauna expresión ubicua. A diferencia de otras isoformas FABP5 ha sido asociadapositivamente con la progresión y el desarrollo de ciertos cánceres, enespecial próstata y mama. Aunque su función en el metabolismo de los mismos esdesconocida.Objetivo: El objetivo final de este trabajo es contribuir al conocimiento e importanciadel metabolismo lipídico en el cáncer así como aportar a la elucidación lasfunciones de las FABPs. Estos estudios podrían tener profundas implicanciaspara el tratamiento y/o diagnóstico de enfermedades hiperproliferativas, comoel cáncer.Métodos: Las células A549 (provenientes de cáncer de pulmón) se cultivaron enmedio DMEM bajo en glucosa (5.5mM glucosa, concentración fisiológica de glucosasanguínea) suplementado con 10% suero fetal bovino, penicilina/ estreptomicina a37°C, 5% CO2 y 100% humedad. El recuento y la viabilidad celular se evaluaronrutinariamente en hemocitómetro con azul de tripán. Los niveles de expresión delas FABPs fueron determinados mediante Western Blot. Células A549 fueron transfectadascon siRNAs contra FABP5 o un pool de siRNAs control por 48h, para el modelo knockdown, o incubadas por 24h con 100uMdel inhibidor de FABPspan-específico HTS01037. En los ensayos de incorporación, las células se incubaron con [1-14C] 16:0 en medio suplementadocon 0.5% BSA libre de FA o con [1-14C] acetato por 4 hs. Laincorporación se estimó por conteo de centelleo líquido en lípidos totalesextraídos por el método de Bligh & Dyer y normalizados al contenidoproteico. Los ensayos de migración celular se realizaron por 12 hs por elmétodo de herida y los de adhesión celular mediante tinción con violeta cristalluego de 2 hs de sembrado.Resultados: Evaluamos los niveles de FABP5 en distintas líneas celularesy seleccionamos las células A549 como modelo de estudio. En esta línea celularsólo se observó la presencia de la isoforma 5 por Western Blot,consistentemente con la expresión a nivel de RNA (The Human Protein Database).Debido a la expresión considerable de FABP5 en estas células y a su dependenciade la síntesis endógena de FA para la proliferación fueron utilizadas paragenerar modelos celulares con niveles alterados de FABP5. La disminución deFABP5 por siRNAs o la inhibición de FABPs con HTS01037 redujeron la proliferacióny la capacidad migratoria de las células A549; no se vio afectada, sin embargo,la adhesión celular. Estas alteraciones podrían estar relacionadas con lafunción de FABP5 como trasportadora de ácidos grasos hacia la síntesis demembranas.  De hecho, la disminución oinhibición de FABP5 redujo la incorporación de [C14] ácidos grasos exógenos. Sinembargo, no se alteró la distribución porcentual del FA marcado en lasdistintas clases de lípidos lo cual sugiere que FABP5 no direccionadiferencialmente FA hacia alguna vía lipogénica particular. Asimismo,observamos una disminución de la síntesis endógena de FA al inhibir las FABP5 utilizandoHTS01037. Más aún, la inhibición de la síntesis de novo de ácidos grasos con C75 (inhibidor de la enzima ácidograso sintasa) produjo una disminución de los niveles de FABP5 lo cual refuerzala conexión entre FABP5 y la síntesis de novode ácidos grasos.Conclusión: En conjunto, nuestros resultados sugieren que FABP5es importante en el metabolismo lipídico estando involucrada en laincorporación de los FA exógenos como así también en la síntesis endógena delos mismos. Más aún, FABP5 es necesaria para mantener el fenotipo transformadoen células tumorales.