Análisis comparativo en la interacción lípido-proteína de ∆K107, una variante pro-aterogénica de Apolipoproteína A-I

MATÉ, SABINA; GONZALEZ, MARINA ; DÍAZ LUDOVICO, IVO; VAZQUEZ, ROMINA; TRICERRI, ALEJANDRA; GARDA, HORACIO

San Luis

Congreso; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2017

Universidad Nacional de San Luis Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas ? CONICET

La apolipoproteína A-I (ApoA-I) es el componente proteicomayoritario de las lipoproteínas de alta densidad (HDL). Las HDL remueven elexceso de colesterol de los tejidos periféricos trasportándolo al hígado parasu excreción en forma de sales biliares; este proceso es conocido comotransporte reveso de colesterol (TRC). Se han descripto diversas variantesnaturales de ApoA-I que poseen efectos ateroprotectivos o pro-aterogénicos. Enla variante natural de ApoA-I K107→0 (∆K107); se han descripto efectospro-aterogénicos en sus portadores. Diversos estudios sugieren modificacionesestructurales en la variante de deleción; sin embargo los mecanismosmoleculares alterados en el TRC para dicha mutante siguen siendo desconocidos.El objetivo del trabajo es analizar las diferencias en lainteracción lípido-proteína para ApoA-I y ∆K107 comparativamente, en modelossimples mediante técnicas biofísicas.Medición de pérdida de contenido acuoso de vesículaslipídicas: las vesículas fueron construidas con POPC o POPC:Col (4:1) porultrasonicación en medio acuoso en presencia del complejo fluorescente [Tb-DPA]y posterior cromatografía de exclusión en buffer tris 10mM NaCl 150mM EDTA 30mM. Las medidas de fluorescencia se realizaron a lexcitación=250nm y lemisión= 544nmagregando ApoA-I o ∆K107 a concentraciones finales de 0,3mg/mL. Los cambios enintensidad de fluorescencia se analizaron comparativamente con aquel producidopor el agregado de 1% SDS. Medidas de adsorción/inserción proteica a monocapaslipídicas mediante la Balanza de Langmuir: Se construyeron monocapas de POPC oPOPC:Col (4:1). Se llevó el film lipídico a una presión inicial (P0) de 10mN/m. La subfase fue en todos los casosPBS. Las proteínas fueron dializadas contra PBS, e inyectadas en la subfase auna concentración final de 0,0015mg/mL. Las isotermas de adsorción/inserción se realizaron a 20°C ± 1,5°C. Las medidas de fluorescencia evidencian que tanto ApoA-Icomo ∆K107 interaccionan con liposomas. Comparativamente, no se observarondiferencias significativas en la variación de fluorescencia por incubación conApoA-I o ∆K107, tanto en liposomas de POPC como de POPC:Col. Sin embargo, ambasproteínas presentaron una mayor interacción con liposomas de POPC:Col respectoa los de POPC. Los ensayos de adsorción/inserción de ambas proteínas en monocapaslipídicas mostraron una disminución significativa en los ∆Pgenerados por ∆K107 respecto a los generados por ApoA-I en monocapas de POPC a P0~10mN/m.Este resultado no se repitió en monocapas de POPC:Col. Adiferencia de lo observado en los ensayos con liposomas, en los ensayos con monocapas lipídicas no se observó la interacción preferencial de ambas proteínas con mezclas de POPC:Col (4:1).