Lipid-protein interaction of a natural variant of apolipoproteinA-I. Studies with monolayers and bilayers models

GARDA, H. A.; VASQUEZ ROMINA; TRICERRI, M. A; GONZALEZ MARINA CECILIA; DÍAZ LUDOVICO IVO; MATE SABINA

San Luis

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2017

Universidad Nacional de San Luis

La apolipoproteína A-I (ApoA-I) es el componente proteico mayoritario de las lipoproteínas de alta densidad (HDL). Las HDL remueven el exceso de colesterol de los tejidos periféricos trasportándolo al hígado para su excreción en forma de sales biliares; este proceso es conocido como transporte reveso de colesterol (TRC). Se han descripto diversas variantes naturales de ApoA-I que poseen efectos ateroprotectivos o pro-aterogénicos. En la variante natural de ApoA-I K107→0 (∆K107); se han descripto efectos pro-aterogénicos en sus portadores. Diversos estudios sugieren modificaciones estructurales en la variante de deleción; sin embargo los mecanismos moleculares alterados en el TRC para dicha mutante siguen siendo desconocidos. El objetivo del trabajo es analizar las diferencias en la interacción lípido-proteína para ApoA-I y ∆K107 comparativamente, en modelos simples mediante técnicas biofísicas.Metodologías:Medición de pérdida de contenido acuoso de vesículas lipídicas: Las vesículas fueron construidas con POPC o POPC:Col (4:1) por ultrasonicación en medio acuoso en presencia del complejo fluorescente [Tb-DPA] y posterior cromatografía de exclusión en buffer tris 10mM NaCl 150mM EDTA 30 mM. Las medidas de fluorescencia se realizaron a λexitación= 250nm y λemisión= 544nm agregando ApoA-I o ∆K107 a concentraciones finales de 0,3mg/mL. Los cambios en intensidad de fluorescencia se analizaron comparativamente con aquel producido por el agregado de 1% SDS.Medidas de adsorción/inserción proteica a monocapas lipídicas mediante la Balanza de Langmuir: Se construyeron monocapas de POPC o POPC:Col (4:1). Se llevó el film lipídico a una presión inicial (П0) de 10mN/m. La subfase fue en todos los casos PBS. Las proteínas fueron dializadas contra PBS, e inyectadas en la subfase a una concentración final de 0,0015mg/mL. Las isotermas de adsorción/inserción se realizaron a 20°C ± 1.5°C. Resultados: Las medidas de fluorescencia evidencian que tanto ApoA-I como ∆K107 interaccionan con liposomas. Comparativamente, no se observaron diferencias significativas en la variación de fluorescencia por incubación con ApoA-I o ∆K107, tanto en liposomas de POPC como de POPC:Col. Sin embargo, ambas proteínas presentaron una mayor interacción con liposomas de POPC:Col respecto a los de POPC. Los ensayos de adsorción/inserción de ambas proteínas en monocapas lipídicas mostraron una disminución significativa en los ∆П generados por ∆K107 respecto a los generados por ApoA-I en monocapas de POPC a П0~10mN/m. Dicho resultado no se repitió en monocapas de POPC:Col. A diferencia de lo observado en los ensayos con liposomas, en los ensayos con monocapas lipídicas no se observó la interacción preferencial de ambas proteínas con mezclas de POPC:Col (4:1).