Proteoma de las Gotas Lipídicas Nucleares

LAGRUTTA, LUCÍA C.; TREJO, SEBASTIÁN A; VES LOSADA, ANA

San Luis

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2017

IMIBIO-SL (CONICT-UNSL)

En el núcleo de las células eucarióticas, los lípidos neutros se organizan y compartimentalizan en una pequeña población de Gotas lipídicas (nLD) construidas por tres pequeñas LD que representan el 10% de las poblaciones celulares de LD (nLD + cLD: LD citosólicas).Las nLD estarían involucradas en la homeostasis lipídica, y en el interior nuclear servirían como un sistema buffer capaz de aportar o incorporar en forma rápida proteínas y lípidos involucrados en vías de señalización, aportando ligandos (FA, DAG, etc.) para factores de transcripción, sustratos, y enzimas del metabolismo lipídico y de otros procesos que se desarrollan dentro del núcleo.Las nLD, están constituidas por un core hidrofóbico de triacilglicéridos (TAG) y esteres de colesterol (CE), rodeado de una monocapa de lípidos polares (LP), colesterol (C) y proteínas asociadas. Los LP nucleares participan activamente como segundos mensajeros en diferentes vías de señalización que involucraran a glicerofosfolípidos (GPL) y esfingolípidos (SL). Los LP nucleares se caracterizan por contener mayoritariamente 20:4n-6 y 18:0, mientras que los LN 16:0, 16:1n-7, 18:2n-6 y 18:1n-9 (AO) esterificados en sus moléculas. Previamente hemos demostrado que las nLD son un organoide celular dinámico, inducido reversiblemente por AO que requiere de la biosíntesis en curso de TAG, CE y PL, y determina cambios morfológicos coordinados entre las poblaciones celulares de LD (nLD y cLD).El objetivo de este trabajo fue comenzar a dilucidar las funciones celulares de las nLD, su metabolismo y su organización estructural. Se utilizó como herramienta experimental el análisis de la proteómica de las nLD por GeLC-MS en condiciones fisiológicas y no patológicas a partir de una fracción aislada de las nLD de hígado de rata.En una primera etapa se desarrolló un protocolo experimental que permitió concentrar y aislar a las proteínas de las nLD, teniendo en cuenta que son un componente celular minoritario (0,0004%) y que se aíslan en una banda de un gradiente de sacarosa en la que las LD están muy diluidas. El protocolo incluyó la eliminación de la muestra de los interferentes con el análisis de proteómica, como la sacarosa (proveniente de los gradientes) y los LN que son moléculas hidrofóbicas y además los componentes mayoritarios de las LD.En estas condiciones experimentales se identificaron 35 proteínas, y se clasificaron en las siguientes categorías funcionales: Citoesqueleto y Estructurales (50%), Factores de transcripción (23%), Plegado de proteínas y modificaciones postraduccionales (9%), Proliferación celular y cáncer (9%), Metabolismo lipídico (6%) y Transporte (3%). En conclusión, estos son los primeros resultados de la proteómica de las nLD y demuestran que el protocolo desarrollado permite el estudio por GeLC-MS. Hay una gran diversidad en las funciones de celulares de las proteínas identificadas y las nLD estarían involucradas directamente o indirectamente en dichos procesos.