Liberación de microvesículas de eritrocitos tratados con alfa hemolisina de E.coli

KAREN STRACK; VANESA HERLAX; SABINA MATÉ

Jornada; Jornadas de la Facultad de Ciencias Médicas UNLP; 2016

Introducción: Alfa hemolisina (HlyA) pertenece a una familia de toxinas denominadas RTX (Repeat in toxins), y es uno de los factor de virulencia de las cepas uropatogénicas de E.coli. HlyA, al igual que muchas de las toxinas de esta familia, debe ser acilada en dos residuos internos de Lys en el interior de la bacteria antes de ser secretada al medio. Esta modificación postraduccional hace que la toxina pase de la forma inactiva (ProHlyA), sin acilar, a una proteína activa acilada (HlyA). En los últimos años hemos estudiados los efectos que produce esta toxina a los eritrocitos a concentraciones sublíticas. Hemos encontrado que induce un aumento bifásico de calcio [1], que produce la activación de calpaínas que degradan proteínas del citoesqueleto; siendo responsables de los cambios morfológicos que sufren los eritrocitos previos a la lisis [2]. Además, HlyA activa esfingomielinasas endógenas, produciendo un aumento de ceramida en la membrana, hecho que cambia las propiedades físicas de la membrana [2]. Por otro lado, estudios más detallados de los cambios morfológicos observados, demostraron que estos cambios son independientes del ingreso de calcio [3] y que HlyA sufre un proceso de transformación de discocito a esferocito [4]. Objetivos: Todos los eventos anteriormente descriptos ocurren en aquellas células que secretan microvesículas al medio como un proceso de remodelación de la membrana [5], [6]. Por otro lado se ha visto que estas microvesículas participan en proceso de intercomunicación celular. Es por eso que el objetivo del presente trabajo fue estudiar la liberación de microvesículas de eritrocitos tratados con HlyA.Materiales y métodos: Se realizaron observaciones en microscopio electrónico de transmisión (MET) de eritrocitos tratados con HlyA y ProHlyA a concentraciones sublíticas y de microvesículas purificadas por ultracentrifugación. Se realizo una caracterización de las proteínas de las microvesículas por SDS-PAGE 10 %.Resultados: Las observaciones de cortes de eritrocitos tratados con HlyA por MET mostraron la secreción de microvesículas, mientras que eritrocitos tratados con la toxina sin acilar (ProHlyA) no liberaron estas partículas. Por otro lado se pudieron observar microvesículas de 200 nm en las muestras tratadas con HlyA. Los perfiles electroforéticos de estas vesículas son distintos a los fantasmas de eritrocitos y tiene el mismo perfil que aquellas microvesícualas obtenidas con un ionóforo. Conclusiones: Eritrocitos tratados con concentraciones subliticas de HlyA liberan microvesículas de 200 nm, Bibliografía:1.Sanchez, S., L. Bakás, E. Gratton, and V. Herlax, (2011). PLoS One. 6 (6): p. e21127.2.Velasquez, F.C., S. Mate, L. Bakas, and V. Herlax, (2015). Biochim Biophys Acta. 1848(11 Pt A): p. 2779-88.3.Vazquez, R.F., S.M. Mate, L.S. Bakas, C. Munoz-Garay, and V.S. Herlax, (2016). Biochim Biophys Acta. 1858(8): p. 1944-1953.4.Hagerstrand, H. and B. Isomaa, (1992). Biochim Biophys Acta. 1109(2): p. 117-26.5.Freyssinet, J.M., (2001). J Thromb Haemost. 1(7): p. 1655-1662.6.Boulanger, C.M., N. Amabile, and A. Tedgui, (2006). Hypertension. 48(2): p. 180-186.