Regulación dinámica de ATP extracelular en Escherichia coli.

CORA LILIA ALVAREZ; NATALIA LAURI; GERARDO CORRADI; ELIANA DUARTE; MARIANA SACERDOTI; LUCIANO NIEVEZ; MARIA VICTORIA ESPELT; MARA FLORENCIA LEAL DENIS; VANESA HERLAX; PABLO JULIO SCHWARZBAUM,

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

E. coli es el principal anaerobio facultativo del sistema digestivo. Deacuerdo al contexto fisiológico del huésped, este organismo puedecaptar ATP exógeno, siendo metabolizado por nucleotidasas en elperiplasma, o liberar ATP del periplasma al medio extracelular. In vitrola regulación de ATP extracelular (ATPe) de E. coli depende delbalance entre la liberación de ATP y la hidrólisis de ATPe pornucleotidasas. Se estudió la regulación de ATP extracelular (ATPe) desuspensiones de E. coli DH5α (2x109 cél/ml) a 20 °C. Hidrólisis deATPe: se evaluó en suspensiones mediante la liberación de [32P]Pi apartir de [γ 32P]ATP. En medios con fosfato (M9), a 100-1000 nM ATP,la acumulación de Pi fue lineal en el tiempo y la actividad ATPasica(vi) fue proporcional a la [ATPe]. A 600 nM y 500 μM ATPe vi fue 2,77-19,26 veces superior en un medio sin fosfato (hepes) que en M9. Enambos medios a 600 nM vi fue inhibida 28 % por suramina y 71 % porel análogo de ATP (AMP-CPP). Liberación de ATP: se evaluó ensuspensiones mediante la cuantificación de la [ATPe] porluminiscencia. En ausencia de estimulo, la [ATPe] fue 202 ± nM/108cels. La exposición a 10 μM del péptido mastoparan 7 no afectó laviabilidad, e indujo un aumento de 414 veces en la liberación de ATP,alcanzándose una [ATPe] de 1010 ± nM/108 cels (n= 13). Laincubación con el péptido melitina produjo liberación de ATPdependiente de la dosis, tanto en ausencia como en presencia de lisis.En conclusión, en suspensiones bacterianas, y en ausencia de lisis,se verificó: - actividad ATPasica en un amplio rango deconcentraciones. En medios sin fosfato, vi fue mayor. Esto escompatible con la existencia de dos nucleotidasas, una de las cualeses inhibida por fosfato. - liberación de ATP. Con mastoparan 7 estaliberación es 400 veces superior a la actividad ATPasica. Por lo tanto,la evolución temporal de acumulación de ATPe refleja el perfil cinéticode liberación de ATP. Con subsidios UBACYT (20020100100090),CONICET (PIP 639)