Ação da riboflavina como potencializadora da expressão gênica de 6-4-fotoliase em Metarhizium robertsii para aumento da tolerância à radiação ultravioleta

PEREIRA-JUNIOR, R.A; HUARTE BONNET, CARLA; PAIXÃO, F.R.S; LUZ, CA; PEDRINI, N; FERNANDES E.K

Seminario; XIII Seminário de Patologia Tropical e Saúde Pública & VI Semana de Biotecnologia; 2015

A eficácia de fungos entomopatogênicos, como Metarhizium spp., para controle biológico de vetores ainda tem sido limitada, uma vez que estes microrganismos são susceptíveis a fatores abióticos de estresse, como a radiação solar ultravioleta. O presente estudo investigou a resposta de Metarhizium spp. à exposição à radiação UV (UV-A e UV-B) quando crescidos em meio suplementado com riboflavina, por meio da expressão gênica de fotoliases. Foram utilizados os isolados ARSEF 2575 (M. robertsii) e ARSEF 324 (M. acridum). Os isolados foram cultivados em meio BDA (batata dextrose ágar), com ou sem riboflavina, no escuro a 27 ± 1°C por 15 dias. Os fungos foram expostos à radiação UV-A (100,8 kj.m-2) ou UV-B(3,9 kj.m-2) e expostos ou não à luz visível (16 W.m-2) após a radiação UV. Foi feita a extração de RNA total, a síntese da primeira cadeia de cDNA e, em seguida, as amostras foram estudadas quanto à expressão gênica de fotoliases por PCR em tempo real. Foi realizada análise de variância (ANOVA) e teste SNK. Foram estudados um gene para M. acridum e 2 genes (CDP e 6-4 fotoliases) para M. robertsii. Os dados de CDP fotoliase para M. robertsii, assim como os de fotoliase para M. acridum, evidenciaram que este gene foi expresso, em maior quantidade, em fungos expostos à radiação (UV-A ou UV-B) ou luz visível, quando comparados às culturas não expostas. No entanto, em geral, não houve diferença significativa entre as condições de cultivo e de exposição, apesar de CDP fotoliase de M. robertsii cultivado em meio enriquecido com riboflavina ter apresentado maior expressão ao associar radiação UV-A ou UV-B com luz visível. Já em relação a 6-4- fotoliase em M. robertsii, observou-se que todos os cultivos em meio contendo riboflavina e expostos a UV-A, ou combinação de UV-A ou UV-B e luz visível, apresentaram significativamente maior expressão deste gene, indicando provável potencialização da expressão de 6-4- fotoliase causada pelo acréscimo de riboflavina ao meio de cultivo. Isto se deve, possivelmente, ao fato do comprimento de onda de UV-A ser suficiente para ativação da expressão da 6-4- fotoliase, fazendo com que ela, mesmo sem posterior exposição à luz visível, já seja capaz de estimular o aumento de expressão deste gene. Estes dados, portanto, sugerem que a 6-4- fotoliase possui um papel importante de reparação em M. robertsii, sendo que o acréscimo de riboflavina ao meio potencializa sua expressão gênica, conferindo possivelmente maior tolerância. No entanto, a expressão das fotoliases em M. acridum parece não ser influenciada pela adição de riboflavina ao seu cultivo.