INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
LA ENZIMA GLICEROL-3-FOSFATO ACILTRANSFERASA 2 (GPAT2) ES NECESARIA PARA LA ESPERMATOGÉNESIS EN EL RATÓN
Autor/es:
GARCIA FABIANI, M.B.; STRINGA, P.; CATTANEO, E.R.; PELLON-MAISON, M.; HENNING, M.F.; MONTANARO, M.A.; GONZALEZ BARO, M.R.
Lugar:
La Plata
Reunión:
Congreso; II Congreso Internacional; 2015
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Medicas UNLP
Resumen:
Introducción. Las enzimasglicerol-3-fosfato aciltransferasas (GPAT) catalizan la reacción entre elglicerol-3-fosfato y acil-CoA, siendo su producto el ácido lisofosfatídico. Encélulas de mamífero se han descripto cuatro isoformas de GPAT; las GPAT1, 3 y 4están involucradas en la síntesis de novode glicerolípidos y su expresión está asociada a tejidos lipogénicos. GPAT2, sibien presenta alta homología de secuencia proteica con GPAT1, presenta unpatrón de expresión anómalo ya que se expresa prominentemente en testículo. Latranscripción del gen a lo largo de la maduración sexual posnatal en el ratóntiene un pico de expresión a los 15 días post parto y en este momento como enla adultez se expresa prominentemente es espermatocitos en paquiteno. Hemosdemostrado que esta proteína además se expresa en tejidos tumorales humanos yque su expresión aberrante está regulada al menos en parte por mecanismosepigenéticos, pudiendo clasificar a esta enzima como un antígeno cáncertestículo.Objetivos. Comprenderel rol fisiológico de GPAT2 en relación con la espermatogénesis y la fertilidadasí como los mecanismos que regulan su transcripción.  Hipotetizamos que, como sucede con otrosgenes cáncer-testículo, el silenciamiento de Gpat2 murina afectaría negativamente el proceso espermatogénico yque este gen podría estar regulado por algún mecanismo epigenético.Materialesy métodos.Se silenció a Gpat2 in vivo medianteun sistema lentiviral que expresa un shRNA específico contra Gpat2, inyectando in situ en lostúbulos seminíferos de ratones de 11 días de edad. Como control, se inyectó unshRNA que no silencia ningún gen conocido (Scramble, SCR). Al alcanzar lamadurez sexual, se colocaron en una jaula con dos hembras cada uno hasta quecada una tuviera tres camadas de cría (dos grupos de ratones uno sh-Gpat2 y otro SCR). Luego sesacrificaron, se realizaron los cálculos estadísticos con la cantidad de críasque tuvo cada grupo de ratones y los testículos fueron utilizados para medir laexpresión de Gpat2 y genes marcadoresde distintos estadíos de la espermatogénesis. Además se estudió el estado demetilación de la región promotora de Gpat2durante la maduración sexual en ratón mediante tratamiento del ADN conbisulfito de sodio, para determinar si el estado de metilación correlaciona conel perfil de expresión de esta enzima durante la maduración sexual del ratón.Resultados. Logramos  silenciar exitosamente Gpat2 in vivo con el sistema lentiviral; el análisis histológico einmunohistoquímico de cortes de testículos con Gpat2 silenciada mostró unadisminución severa del número de células espermáticas maduras en los túbulosseminíferos de los animales con expresión reducida de Gpat2. El grupo de ratones sh-Gpat2tuvo un número de crías significativamente menor que el grupo SCR en la primercamada y el análisis de la expresión de genes marcadores revela que laexpresión de Gpat2 en los ratones sh-Gpat2detiene la espermatogénesis en el estadío de paquiteno, lo que coincide con elanálisis histológico. Además, verificamos que la expresión de esta enzima estáregulada a nivel epigenético ya que, a diferencia de otras edades, a los 11días post parto la región promotora de Gpat2se encuentra totalmente desmetilada. Conclusiones: Estosresultados demuestran que GPAT2 es importante para el progreso normal del cicloespermatogénico durante el desarrollo testicular postnatal, como así tambiénpara la fertilidad masculina, y que su expresión durante la maduracióntesticular posnatal está regulada, a menos en parte, epigenéticamente por metilaciónde su promotor.