INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización estructural de la apolipoproteína A-I en la interacción con el lipopolisacárido bacteriano.
Autor/es:
HENNING, MARÍA FLORENCIA; BAKÁS, LAURA
Lugar:
Bernal, Bs As, Argentina
Reunión:
Workshop; Workshop de la Sociedad Argentina de Biofísica.Biofísica de macromoléculas.; 2007
Institución organizadora:
SAB
Resumen:
El lipopolisacárido (LPS, endotoxina) es liberado de la membrana externa de las bacterias Gram negativas. El LPS induce una variedad de efectos biológicos, que pueden culminar en la manifestación de shock séptico.  Previamente fue reportado que las HDL protegen in vivo contra el LPS,  indicando que la función anti-endotoxina de las HDL es debida a la interacción entre el LPS y la apolipoproteína AI, constituyente proteico mayoritario de las HDL. El objetivo del presente trabajo fue investigar el efecto de la interacción apo AI-LPS sobre la estructura de la proteína. La interacción apo AI-LPS fue confirmada por ensayos de cross-linking y autorradiografía utilizando el derivado fotoactivable 125I -ASD-LPS. Al incubar apo AI-LPS la intensidad de fluorescencia intrínseca de la proteína disminuye, este fenómeno puede deberse a un cambio conformacional en la apo AI, que resulta en el quenching de los Trp, por residuos vecinos. Ensayos de oxidación de los Trp con NBS demostraron que el LPS no interactúa con la apo AI por medio de los Trp. En los espectros de CD de la apo AI-LPS se puede observar una pérdida de estructura alpha-hélice. En ensayos de proteolisis limitada con tripsina se observó un patrón diferencial de fragmentos proteolíticos, en presencia de LPS. La estabilidad química de la proteína fue analizada luego de incubar apo AI o apo AI-LPS con diferentes concentraciones de [GdnHCl]. La curva de desnaturalización de la proteína se ajusta a un modelo de dos estados y en presencia de LPS se observó una disminución en la cooperatividad del proceso de desnaturalización. Los valores de G H2O obtenidos fueron 3544 kcal/mol and 1424 kcal/mol en ausencia y presencia de LPS, respectivamente.  El valor del parámetro m (coeficiente de proporcionalidad relacionado con la cantidad de regiones hidrofóbicas de la proteína expuestas al solvente durante la desnaturalización) disminuye de 2107 a 937, en presencia de LPS. Se realizaron ensayos de proteolisis con CNBr en presencia de 125I-ASD-LPS, con el fin de identificar la región de interacción. Los ensayos preliminares indican que el LPS interacciona con la región Ct de la apo AI.