Niveles de estrés oxidativo en el hongo entomopatógeno Beauveria bassiana crecido en hidrocarburos similares a los de insecto

C. HUARTE-BONNET; M. P. JUAREZ; N. PEDRINI

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2013). II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental (DIMAyA).; 2014

Los hongos entomopatógenos atacan a sus insectos hospedadores mediante la penetración a través de su cutícula, cuya capa más externa está compuesta por hidrocarburos alifáticos de muy larga cadena. Una vez que alcanzan la hemolinfa, los hongos se multiplican mediante células levaduriformes llamadas blastosporos, que por invasión mecánica y liberación de toxinas producen la muerte del insecto. El éxito de la infección depende tanto de la capacidad del hongo para degradar los componentes cuticulares como para evadir la respuesta inmune del insecto. Es de esperar que durante la primera etapa los hongos se vean expuestos a altos niveles de estrés oxidativo, debido a la liberación de radicales libres del oxígeno producidos durante la degradación de los lípidos cuticulares. El objetivo de este trabajo fue evaluar los niveles de estrés oxidativo del hongo Beauveria bassiana crecido en hidrocarburos, tanto mediante la actividad de enzimas antioxidantes, los patrones de expresión de sus genes codificantes, como la cuantificación de los niveles de peroxidación lipídica (LPO). B. bassiana se cultivó en medio mínimo líquido (6 días, 26 ºC, 150 rpm) adicionado con los hidrocarburos n-hexadecano (C16) o n-octacosano (C28) como única fuente de carbono y energía. Los controles se cultivaron 6 días en un medio completo conteniendo glucosa y extracto de levadura. Se evaluaron mediante espectrofotometría las actividades de superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión transferasa (GST) en homogenato crudo. La LPO se cuantificó en la misma fracción mediante el ensayo de TBARS. Los niveles de los transcriptos se evaluaron mediante PCR cuantitativa a tiempo real (qPCR), para los 3 genes de superóxido dismutasa (sod1, sod2, sod3), los 5 genes de catalasa (catA, catB, catC, catD, catP) y los genes gst y gpx (glutatión peroxidasa). Las actividades SOD y CAT se encontraron aumentadas en hongos crecidos en hidrocarburos respecto a los controles. Las actividades específicas para SOD fueron 1.7 ± 0.1 U/mg (control), 2.2 ± 0.6 U/mg (C16) y 3.2 ± 0.2 U/mg (C28), mientras que para CAT fueron 83 ± 4 U/mg (control), 149 ± 5 U/mg (C16) y 267 ± 24 U/mg (C28). No se encontraron diferencias significativas en la actividad GST. La LPO se encontró aumentada en hongos crecidos en alcanos, con valores de 181.6 ± 34.9 μmoles MDA/mg (C16) y 204.1 ± 22.3 μmoles MDA/mg  (C28) comparados con los controles (131.6 ± 28.1 μmoles MDA/mg). Los niveles de expresión de sod1 (Cu/Zn SOD) se encontraron aumentados tanto en C16 (6.7 ± 0.01 veces) como en C28 (22.0 ± 7.4 veces) respecto a los controles, mientras que sod2 y sod3 (Mn SOD) se expresaron en niveles similares en todas las muestras. Los genes cat más inducidos fueron catA (4.5 ± 0.8 veces) y catP (3.2 ± 1.9 veces), en ambos casos en C28. Los niveles de expresión de gst y gpx variaron entre 1 y 3 veces para todas las condiciones respecto a los controles.