Caracterización parcial de glicolípidos secretados por el hongo entomopatógeno Beauveria bassiana crecido en hidrocarburos

C. HUARTE-BONNET; J.R. GIROTTI; M. P. JUAREZ; N. PEDRINI

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología. Primera Reunión de la Asociación Micológica Carlos Spegazzini.; 2014

La infección de insectos por hongos entomopatógenos comienza por la penetración de conidios a través de la cutícula del hospedador, cuya superficie está compuesta por una delgada capa de lípidos donde predominan hidrocarburos alifáticos de muy larga cadena. A pesar de que se conocen las vías metabólicas involucradas en la degradación de hidrocarburos de insecto por hongos entomopatógenos, no existe hasta el momento ninguna información acerca de los mecanismos participantes en la captación de estos compuestos por parte de los hongos. En bacterias y levaduras degradadoras de alcanos está facilitada por moléculas anfipáticas que actúan como biosurfactantes, entre los que predominan glicolípidos y glicoproteínas. El objetivo de este trabajo fue identificar los compuestos con potencial rol surfactante secretados al medio de cultivo por el hongo Beauveria bassiana en presencia de hidrocarburos similares a los de insecto. B. bassiana fue crecido inicialmente en medio completo líquido (MC) (3 días, 26 ºC, 150 rpm) y el micelio resultante se utilizó para  inocular un medio salino mínimo (MM) con el agregado de n-hexadecano o n-octacosano como única fuente de carbono. Ambos cultivos fueron crecidos en las mismas condiciones por otros 3 días, tras lo cuál las células fueron descartadas. Los controles se cultivaron 6 días en MC. Los compuestos secretados al medio fueron secuencialmente extraídos con una mezcla de cloroformo:metanol:agua (30:60:8) y parcialmente purificados en columnas de sefarosa. Las fracciones obtenidas se hidrolizaron en presencia de metanol/ácido clorhídrico. En la fase metanólica se identificaron hidratos de carbono mediante el ensayo colorimétrico de orcinol, mientras que la fase orgánica se analizó mediante cromatografía en capa delgada y cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa. En ninguna de las fracciones anteriores se detectó la presencia de proteínas. En la fase orgánica se identificaron una mezcla de micolatos (ácidos grasos de muy larga cadena, α-ramificados, β-hidroxilados). En coincidencia con lo reportado en bacterias, los micolatos sufrieron una pirólisis en el inyector del cromatógrafo, detectándose una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados (donde predominó ampliamente el C20:0) y de alcoholes grasos primarios, con predominio de los alcoholes de 30 y 32 átomos de carbono. Este es el primer reporte en la identificación de micolatos en hongos, siendo todos los reportes anteriores referidos a biosurfactantes bacterianos. La ausencia de proteínas secretadas sugiere que sólo estos glicolípidos cumplirían el papel de biosurfactantes. En el futuro se espera poder identificar los hidratos de carbonos constituyentes, para elucidar la estructura completa de los glicolípidos. Por otro lado, se avanzará con el estudio de la función surfactante de esos compuestos para comprender su rol en la captación de hidrocarburos de insecto.