Estudio de la composición de los huevos de Pomacea maculata Perry, 1810 y caracterización preliminar de la proteína responsable de sus efectos neurotóxicos.

GIGLIO, M.; HERAS, H.; ITUARTE,S.

Montehermoso, Buenos Aires

Taller; Pomacea 2013, V Taller ¨Biología de Ampullariidae¨; 2013

Llenos de sustancias para nutrir, los huevos de la mayoría de los animales sufren una intensa depredación. Dentro de las excepciones a esta regla están los huevos de algunos caracoles de agua dulce sudamericanos del género Pomacea. Pomacea tiene la particularidad de oviponer fuera del agua, lo que expone los huevos a la insolación, desecación y depredadores terrestres. Estudios previos, principalmente en la especie P. canaliculata, han demostrado que para enfrentarse a estas condiciones severas se han desarrollado diversas estrategias, entre ellas, la adquisición de una proteína con efecto neurotóxico, PcPV2. El objetivo de nuestro trabajo es analizar las propiedades de los huevos de P. maculata, una especie emparentada, con especial énfasis en la búsqueda de una proteína neurotóxica, similar a PcPV2 y analizar sus propiedades y efectos. Adultos de P. maculata fueron recolectados cerca del Río Paraná en San Pedro, Buenos Aires, y mantenidos en acuarios para obtener puestas. Las proteínas fueron aisladas y purificadas a partir de huevos combinando centrifugación secuencial, ultracentrifugación y cromatografía. La fracción aislada fue analizada por electroforesis, para determinar su peso molecular y la composición y peso molecular de sus subunidades. Para evaluar su toxicidad se utilizaron ratones BALB/c hembra separados en grupos de 5 individuos que fueron inyectados por vía intraperitoneal con buffer salino (controles) o diferentes diluciones seriadas de PmPV2. Los ratones fueron observados cada 24h durante 96h y se registraron los signos presentados y el número de muertes. Pomacea maculata presenta una perivitelina tóxica, con un peso molecular de 465 kDa, conformada por heterodímeros de 98 kDa, compuestos por subunidades de 68 kDa y 30 kDa unidas por puente/s disulfuro. Dada la similitud estructural con PcPV2, denominamos a esta proteína PmPV2. Ésta, al igual que PcPV2, produce una alta mortalidad en los ratones, así como debilitamiento, parálisis de los miembros posteriores y movimientos espásticos de la cola, entre otros. Clásicamente se consideraba a las perivitelinas como proteínas de reserva, pero los estudios actuales indican que se trata de proteínas con múltiples funciones, incluyendo inhibidores de proteasas, aglutinantes y antioxidantes y entre las cuales ahora se destacan estas proteínas con funciones neurotóxicas presentes en 2 especies simpátricas. Apoyándonos en estos resultados se pretende en un futuro: determinar la composición bioquímica de los huevos, en particular de sus lípidos, proteínas y glúcidos; evaluar el grado de toxicidad de los huevos frente a potenciales depredadores; y analizar sus mecanismos de acción utilizando cultivos celulares, simulaciones in vitro, técnicas histológicas, entre otras.