INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Sistema génico regulable bidireccional para timulina y GFP: caracterización in vivo de su funcionalidad y regulabilidad.
Autor/es:
ZAPPA VILLAR, M.F.; LOPEZ LEÓN, M.; PARDO J; REGGIANI PC
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVIII Reunión Científica Anual, Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2013
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica.
Resumen:
La timulina posee actividad inmunomoduladora; es capaz de modular procesos inflamatorios a nivel central, periférico y local, y procesos analgésicos en el SNC. Recientemente hemos implementado exitosamente terapia génica neuroendocrina con esta hormona en modelos animales de timodeficiencia. Con el fin de disponer de una herramienta más flexible y sofisticada que nos permita ampliar nuestros estudios sobre los efectos terapéuticos de la timulina con una mejor manipulación y control sobre su producción, construimos un sistema génico bidireccional regulable Tet-Off que simultáneamente expresa el gen del metFTS (análogo de timulina) y de la proteína verde fluorescente (GFP), ambos bajo el control de un promotor inducible por doxiciclina (DOX), denominado RAd-(GFP-TRE-FTS)-(tTA). El objetivo del presente trabajo fue caracterizar dicho sistema en el cerebro (i.c.v.), hipófisis y músculo (im.) de la rata, evaluando la funcionalidad y regulabilidad del sistema. El adenovector (RAd) se administró bilateralmente en los ventrículos laterales (2x108 pfu/rata), en la adenohipófisis (4x107 pfu/rata) y en el músculo tibial (1x108 pfu/rata). La expresión de GFP se determinó por observación microscópica y la timulina fue medida por un bioensayo de rosetas. El RAd mostró ser activo en todos los tejidos estudiados. En el músculo estriado se logró una expresión a largo plazo de los transgenes; observándose un aumento de timulina sérica (P<0.05 vs. RAd-control) hasta el día 45 post-inyección y de expresión GFP (75-100% de los cortes de músculos vs. 5-33% con DOX) detectada hasta el día 15 post-inyección. En las hipófisis y en el epéndimo se observó fluorescencia de GFP hasta el día 5 y 20 post-inyección, respectivamente. Asimismo, dicho sistema Tet-Off manifestó una eficiente regulación de la expresión génica en el músculo y cerebro de la rata por el agregado de DOX. La expresión de la GFP permitió identificar fácilmente la coexpresión de timulina recombinante en los órganos tratados.