AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DE UN INHIBIDOR DE PROTEASAS DE LOS HUEVOS DE POMACEA CANALICULATA (GASTROPODA: AMPULLARIIDAE)

BROLA,T.; DREON, M.S.; HERAS, H.

La Plata

Congreso; I Congreso Argentino de Malacología (I CAM); 2013

FCNyM, UNLP

La estrategia reproductiva de Pomacea canaliculata (Lamark, 1822) involucra la oviposición fuera del agua, lo que expone a los huevos a condiciones agresivas de alta radiación solar y depredadores terrestres. A pesar de ello, los huevos eclosionan normalmente y, contrariamente a lo esperable, se registra un solo depredador en condiciones naturales, la ?hormiga de fuego? Solenopsis geminata (Fabricius, 1804). Este hecho llevó a suponer la existencia en el huevo de algún sistema de defensa relacionado con la llamativa coloración rosada que presentan, considerada de advertencia (aposemática). Recientemente hemos determinado que algunos de los componentes de estas defensas serían las proteínas de reserva de su fluído perivitelino (FPV). Este fluido contiene al menos 59 proteínas (perivitelinas), de las cuales solo 2 han sido aisladas y caracterizadas presentando funciones tóxicas y antinutritivas. Una de ellas, la carotenoproteína ovorubina se asoció además a la coloración aposemática junto a una fracción heterogénea llamada PcPV3. Con el objetivo de profundizar el conocimiento acerca de los mecanismos de defensa se procedió a la caracterización bioquímica y funcional de algunos de los componentes de la fracción heterogénea PcPV3. En primer lugar se aisló la fracción PcPV3 del FPV y se pudo determinar que está compuesta por varias proteínas de pequeño tamaño. Luego se desarrolló y optimizó un protocolo de aislamiento de sus componentes combinando ultracentrifugación en gradiente de densidad, cromatografía de intercambio iónico y de exclusión molecular, realizando el control de la pureza mediante electroforesis. Con este protocolo se aislaron 2 proteínas de MW 75 y 120 KDa. Finalmente se analizó la capacidad de éstas de inhibir la tripsina empleando un ensayo colorimétrico. Se pudo determinar que tanto la fracción PcPV3 como las proteínas aisladas provocan una disminución significativa de la actividad de la tripsina. Es probable que este inhibidor esté involucrado en las defensas del embrión limitando la capacidad de un depredador de digerir y utilizar los nutrientes del huevo.