INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
TRANSFERENCIA GENICA ASISTIDA POR MAGNETOVECTORES EN MUSCULO ESQUELETICO
Autor/es:
PEREYRA A; MOREL GR; MYKHAYLYK O; HEREÑU CB
Lugar:
La Plata
Reunión:
Jornada; Jornadas de Medicina 2012. Facultad d e Ciencias Médicas (UNLP).; 2012
Institución organizadora:
Facultad d e Ciencias Médicas (UNLP).
Resumen:
Introducción: La asociación entre vectores virales y nanotecnología ha posibilitado el desarrollo de nuevas y más eficientes estrategias de transferencia génica que se posicionan como valiosas e innovadoras herramientas para el estudio de procesos fisiológicos y fisiopatológicos como así también en la intervención terapéutica. Los sistemas de transferencia asistida por magnetismo combinan los principios de modernas tecnologías sustentadas en el uso de nanopartículas magnéticas (NPMs) y cuyo objetivo principal es dirigir y concentrar moléculas terapéuticas complejadas con elementos magnéticamente activos en sitios diana de tejidos o sistemas utilizando un campo magnético. La Magnetofección incorpora a la metodología previamente descripta un sistema viral o no viral que actúa como vector para el gen de interés. En el marco de nuestra línea de investigación el desarrollo de herramientas confiables para la manipulación experimental de la expresión génica en las células maduras del musculo esquelético es determinante. Aunque las células musculares esqueléticas pueden ser receptivas a sistemas convencionales de transfeccion in vitro e in vivo ninguno de ellos presenta el potencial demostrado por los vectores virales en lo que respecta a la transferencia génica. Sin embargo, y a pesar que los mioblastos inmaduros son perfectamente abordados por las mencionadas estrategias, los miotúbulos multinucleados maduros son mayormente refractarios y el uso alternativo de vectores virales ofrece una relativa baja eficiencia. Objetivos: El objetivo del presente trabajo es determinar si la magnetofección puede constituir una alternativa eficiente para la transferencia génica in vitro e in vivo en células maduras del musculo esquelético. Materiales y métodos: Los experimentos de magnetofección in vitro fueron realizados en la línea celular estable derivada de musculo esquelético C2C12, tanto en su forma inmadura (mioblastos) como madura (miotúbulos). Los vectores virales utilizados, RAd-GFP y RAd-DHPRBeta1a-EYFP fueron construidos previamente en nuestro laboratorio utilizando el método de los dos plásmidos. Las formulaciones de NPMs ensayadas fueron PEI-Mag2 y Atto550-PEI-Mag2 que se encuentra conjugada con un tinte fluorescente rojo. La relación elegida de fgFe de NPM/Partícula Física Viral fue de 2,5 teniendo en cuenta referencias bibliográficas. Luego de la incorporación de las distintas combinaciones a los cultivos celulares estos fueron expuestos a un campo magnético de 300 mT. La eficacia de la transducción fue evaluada 48 hs después mediante observación directa y cuantificación de la fluorescencia en un lector de microplacas. Para los ensayos in vivo se utilizaron ratones machos adultos (22 semanas) de la cepa C57BL/6. Las intervenciones se realizaron en el musculo Soleo derecho e izquierdo de cada animal. En ellos se inyectaron 107 pfu de RAd-GFP y 107 pfu RAd-GFP+Atto550-PEI-Mag2 respectivamente. La relación fgFe/PV ensayada en este caso fue de 4. El miembro trasero izquierdo fue inmediatamente expuesto a un campo magnético externo durante 30 minutos. La expresión de GFP fue evaluada 6 días post inyección mediante microscopia de fluorescencia. Resultados in vitro: Luego de permitir la expresión de GFP/EYFP durante 48 hs, los mioblastos y miotúbulos que habían sido transducidos con los complejos RAd-NPM en presencia de campo magnético mostraron un aumento estadísticamente significativo (p