INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión simultánea de los genes para la green fluorescent protein y el péptido tímico timulina utilizando un sistema adenoviral bidireccional regulable Tet-Off
Autor/es:
POCH B; COSTA MI; REGGIANI PC
Lugar:
Ciudad del Este, Alto Paraná
Reunión:
Jornada; XIX Jornadas de jóvenes investigadores. Asociación de universidades grupo Montevideo (AUGM); 2011
Institución organizadora:
Asociación de universidades grupo Montevideo
Resumen:
Introducción: Una de las cuestiones clave en la implementación exitosa de terapias génicas radica en la capacidad de regular la expresión consistentemente. Con este propósito, y a fin de ampliar nuestros estudios en timulina y su papel en el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-ovárico, construimos un sistema bivectorial regulable Tet-Off que expresa, simultáneamente, los transgenes para green fluorescent protein (GFP) y metFTS (análogo biológicamente activo de timulina). Objetivos: Estudiar la funcionalidad y regulabilidad de nuestro sistema in vitro y evaluar la expresión in vivo mediante su inyección en músculos y ventrículos cerebrales de ratas. Materiales y métodos: El sistema consta de dos vectores adenovirales: 1) RAd-(GFP-TRE-FTS)bidir, unidad de respuesta en la cual la transcripción de los transgenes se encuentra controlada por un promotor bidireccional inducible por doxiciclina (DOX); 2)  RAd-tTA, unidad transactivadora que expresa la proteína regulatoria tTA. La expresión de GFP se determinó por observación microscópica y medición de intensidad de fluorescencia en un fluorómetro. La timulina bioactiva fue medida por un bioensayo de rosetas. Resultados y conclusión: El sistema construido mostró ser activo tanto en experimentos in vitro, donde células CHO-K1 incubadas con ambos RAds mostraron una eficiente expresión de los transgenes, pudiendo inhibirse por el agregado de DOX al medio de cultivo; como in vivo, donde se dosaron niveles significativamente aumentados de timulina sérica y en LCR en ratas inyectadas intramuscular e intracerebrovectricularmente con ambos RAds, respectivamente.  La utilización del gen de la GFP en nuestro sistema sirvió para comprobar, sencilla y rápidamente, la transcripción del gen de la timulina.