INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Comparación de la eficiencia de sistemas adenovirales bidireccionales regulables mono y bivectoriales que expresan simultáneamente timulina y GFP
Autor/es:
POCH B; COSTA MI; GOYA R; REGGIANI PC
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la SAIC; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica.
Resumen:
Una de las cuestiones clave en la implementación de terapia génica radica en la capacidad de regular la expresión consistentemente. Con este propósito, y a fin de ampliar nuestros estudios sobre el rol de la hormona tímica timulina en el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-ovárico, construimos dos sistemas regulables Tet-Off, uno monovectorial y otro bivectorial, que expresan simultáneamente los transgenes para la green fluorescent protein (GFP) y el metFTS (análogo de timulina). Dichos sistemas constan de dos componentes: la unidad de respuesta, en la cual la transcripción de los transgenes se encuentra controlada por un promotor bidireccional regulado negativamente por doxiciclina (DOX), y la unidad transactivadora, que expresa la proteína regulatoria tTA. El sistema monovectorial contiene ambos componentes en un único adenovector recombinante (RAd), mientras que en el bivectorial cada componente es aportado por un RAd independiente. Nuestro objetivo fue determinar, in vitro, la eficiencia de ambos sistemas, comparando su funcionalidad y regulabilidad. Para el estudio de funcionalidad se utilizaron tres líneas celulares (CHO-K1, B92 y C2C12) y 5 MOI diferentes en el rango de 12 a 1000. Para evaluar la regulabilidad se emplearon 5 concentraciones de DOX de 0.01 a 100 ng/ml. Ambos sistemas mostraron ser activos en las tres líneas celulares, observándose diferencias significativas en la expresión de los transgenes a partir de MOI 12 (P<0.001) en el sistema monovectorial y 36 (CHO-K1: P<0.05; C2C12: P<0.001) o 100 (B92: P<0.01) en el bivectorial. La exposición a bajas concentraciones de DOX (0.1 ng/ml) fue suficiente para inhibir la expresión de GFP en ambos sistemas, la cual se determinó por microscopía y fluorometría. La timulina bioactiva fue medida por un bioensayo de rosetas. El sistema monovectorial resultó ser más eficiente en las células estudiadas. El uso del gen de la GFP servirá para comprobar sencilla y rápidamente la expresión del gen de la timulina.