INIBIOLP   05426
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE LA PLATA "PROF. DR. RODOLFO R. BRENNER"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La disección de un barril beta conduce a un dímero funcional
Autor/es:
GISELA R. FRANCHINI; LUCRECIA M. CURTO; JULIO J. CARAMELO; JOSÉ MA. DELFINO
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofisica
Resumen:
La proteína intestinal ligadora de ácidos grasos (IFABP) representa un modelo muy reconocido para el estudio de proteínas de la clase beta. Su estructura está conformada por un barril formado por diez cadenas beta con orientación antiparalela que delimitan la cavidad de unión del ligando y un subdominio alfa-helicoidal. Previamente, en nuestro grupo se aisló y caracterizó una variante abreviada, D98D, la cual carece de la región alfa-helicoidal y de las hebras beta responsables del cierre del barril1,2. D98D ha demostrado ser monomérica, estable en solución y capaz de unir ácidos grasos. Estos resultados pueden explicarse considerando que esta variante estructural preserva la totalidad de los residuos que han sido identificados como parte del núcleo hidrofóbico. En la búsqueda de los determinantes compatibles con la mínima estructura plegada y funcional, se realizó la proteólisis parcial de D98D con clostripaína (Arg-C). Los resultados demostraron que -en presencia del ligando- perdura un fragmento resistente a la degradación proteolítica. Este fragmento, denominado D78D, ha sido clonado, purificado y caracterizado3. El mismo tiene 78 aminoácidos (correspondientes a la sección 29-106 de IFABP) y un peso molecular de 8807 Da por ESI-MS. El análisis estructural y funcional de D78D -por espectroscopía UV, dicroismo circular y fluorescencia- indica que se preserva el contenido de hoja-beta y la estructura terciaria. Asimismo, se demostró su capacidad de unir ácidos grasos. Se debe destacar que la característica más sobresaliente de D78D es su existencia en solución como un dímero levemente expandido, que incrementa su estabilidad en presencia de ácido oleico, un ligando natural de IFABP. Este hecho denota la plasticidad estructural del barril beta, que -lejos de rendir agregados amorfos- probablemente aproveche interacciones entre los bordes de las hebras para consolidar una estructura cuaternaria estable. [1] Curto, L.M.; Caramelo, J.J.; Delfino, J.M. (2005) Biochemistry 44:13847-13857. [2] Curto, L.M.; Caramelo, J.J.; Franchini, G.R.; Delfino, J.M. (2009) Protein Sci 18:735-746. [3] Franchini, G.R.; Curto, L.M.; Caramelo, J.J.; Delfino, J.M. (2009) Protein Sci 18: 2592-2602.