“ Evidencias experimentales de que las membranas resistentes a detergentes (DRMs) no son sinónimo de Rafts.

S.MATÉ; V. HERLAX; R. VAZQUEZ; J. BUSTO; J. SOT; F.M, GOÑI; L.BAKÁS

Congreso; Reunión Anual SAB; 2011

  Evidencias acumuladas en los últimos años han llevado a proponer que las membranas biológicas están organizadas en diferentes microdominios denominados membrane rafts. Si bien la relevancia fisiológica de los mismos en los procesos de señalización celular no se encuentra en discusión, la definición operacional basada en su resistencia a ser solubilizados con detergentes no iónicos generando DRMs enriquecidas en esfingomielina (SM) y colesterol (CHO), que representarían el equivalente bioquímico de los rafts, continúa aún en discusión. El objetivo de este trabajo es la validación de la técnica de las DRMs para el estudio de membrane rafts. Con dicho objetivo se realizaron experimentos tanto en sistemas biológicos (fantasmas de eritrocitos de carnero) como en sistemas modelo. Se obtuvieron DRMs a partir de fantasmas de eritrocitos de carnero y se realizó su caracterización lipídica por técnicas cromatográficas y de lipidómica (LCMS). Sorprendentemente, se encontró que la SM 24:1 constituye la especie molecular mayoritaria en DRMs. La importancia de la estructura de la SM en la interacción con el CHO se estudió mediante ensayos de solubilidad con TX-100 a 4ºC y 37ºC. La formación de fases liquido ordenadas (lo), en sistemas ternarios de DOPC/SMs (16:0) o (24:1)/CHO se estudió mediante microscopía de fuerza atómica (AFM), en bicapas planas soportadas sobre mica, y microscopía confocal en vesículas unilamelares gigantes. Se determinó que las SM 24:1 y 16:0 son las especies mayoritarias tanto en fantasmas como en DRMs y que la solubilidad frente a TX-100 de las mismas en mezclas con CHO es muy similar, tanto a 4ºC como a 37ºC. Sin embargo, los estudios de AFM y microscopia confocal muestran que solo la SM 16:0 forma fases lo con CHO. En conclusión, los resultados recién mencionados nos permiten concluir que las DRMs no serían entidades equivalentes a los rafts.