Caracterización molecular de los genes codificantes de las ácido graso sintasa y ácido graso elongasas del integumento de Triatoma infestans

CALDERÓN FERNÁNDEZ G.; COCCHIARARO BASTÍAS L.; PEDRINI N; JUAREZ M.P

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

La superficie cuticular de Triatoma infestans está cubierta por una capa lipídica en la que predominan hidrocarburos, alcoholes grasos y ácidos grasos libres o esterificados. Estos compuestos tienen un rol fundamental en la supervivencia, fisiología y comportamiento de los insectos, regulan el balance de agua, y por ende la muerte por desecación, participan en la comunicación química como feromonas de contacto en el reconocimiento sexual y en la agregación entre individuos, y participan en diversos mecanismos relacionados con la penetración de agentes químicos y biológicos. Hemos demostrado anteriormente que la ruta de biosíntesis de los lípidos cuticulares se inicia por la acción de dos ácido graso sintasas (FASs); en la formación de cadenas lineales participa una enzima citosólica, en tanto que las cadenas ramificadas se sintetizan por acción de una FAS localizada en el retículo endoplasmático. Los productos de las FASs son elongados por elongasas que conducen a la formación de ácidos grasos de muy largas cadenas (ELOVL). Estos ácidos grasos son precursores de los hidrocarburos, feromonas y demás lípidos cuticulares del insecto. El objetivo de este trabajo fue iniciar la caracterización molecular de estas enzimas clave en la biosíntesis de los lípidos cuticulares. Se purificó RNA total a partir de tejido epidérmico y se obtuvo cDNA mediante RT-PCR. Se diseñaron primers degenerados basados en secuencias conocidas de otros organismos, empleando el programa iCODEHOP (consensus-degenerate hybrid oligonucleotide primer), los mismos fueron utilizados para amplificar secuencias de las enzimas de interés mediante PCR. Los amplicones obtenidos fueron clonados y secuenciados. Se obtuvo una secuencia parcial de 1081 bp con una alta identidad de secuencia (84 - 100%) con las FAS de varias especies de mamíferos y con las de insectos (52 - 62%). Asimismo se obtuvo una secuencia parcial de elongasa con una identidad de secuencia de 65 - 90% con la ELOVL 4 de insectos y de 61 - 67% con la ELOVL 4 de mamíferos y otros vertebrados. A partir de las secuencias parciales, se obtuvieron las secuencias génicas completas de las dos enzimas mediante la técnica de RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends). Estos estudios se continuarán a fin de analizar la expresión diferencial de estos genes en función del sexo y la susceptibilidad a insecticidas.