Amiloidosis cardiaca mediada por una variante de apolipoproteina a-i. interacción con lucosamino glucanos como determinante del tropismo por el órgano blanco

ROSU, S. A; CORTEZ, M. FERNANDA; NAHUEL A RAMELLA; M ALEJANDRA TRICERRI; CALABRESE, GRACIELA C.; GISONNO, ROMINA

Buenos Aires

Simposio; IV Simposio Internacional de Amiloidosis; 2021

GEA- IMTIB

IntroducciónUn enigma altamente interesante en la génesis de la amiloidosis hereditaria es el determinante de la órgano especificidad de las variantes mutantes naturales proteicas. En el caso de la apolipoproteína A-I (apoA-I) esta pregunta cobra especial significancia. Planteamos como hipótesis que interacciones específicas con componentes de la matriz extracelular (ECM) favorecen la retención y/o plegamiento anómalo de las proteínas involucradas.A fin de contestar esta hipótesis, nos proponemos como objetivo, el analizar la unión diferencial de variantes de apoA-I con Glucosaminoglucanos (GAGs) in vitro. Materiales y métodos: La unión a GAGs de apoA-I Arg173Pro (variante natural asociada a amiloidosis cardiaca) o Wt se estudió incubando las proteínas con heparina (HEP) o Dermatán Sulfato (DS) con agitación. Se centrifugaron las muestras, colectando pellet y sobrenadante, y el producto se analizómediante electroforesis, tiñendo los GAGscon Azul de toluidina y las proteínas con Nitrato de Plata Arg173Pro, HEP y una mezcla de ambos (relación 3:1 GAG: proteína), se incubaron y luego eluyeron mediante cromatografía de exclusión molecular colectando fracciones que fueron luego analizadas mediante fluorescencia. Se agregó toluidina a las fracciones, se registró fluorescencia a 595 nm, y scattering a 688 nm.Resultados1)Observamos queArg173Pro interactúa y forma con mayor eficiencia complejos solubles de DS y HEP comparado con Wt.2)Encontramos diferencia en los perfiles de elución de la proteína sola respecto a la incubada con HEP, con un corrimiento en el perfil de elución de la Arg173Prounida vs la libre, lo que indica claramente interacción de proteína-GAGs.3)El aumento de scattering evidencia la formación de un complejo de mayor tamaño. Conclusión final:Los resultados obtenidos avalan en parte el particular tropismo que tiene esta variante por los tejidos que afecta, siendo que en miocardio se concentran GAGs como heparina y heparán sulfato. Por otra parte, el estudio de la interacción proteína-GAGs resulta novedoso para profundizar en la síntesis de compuestos sulfatados, los cuales podrían actuar como fármacos inhibidores de esta interacción. Resultados previos del laboratorio confirman en modelos sintéticos, que Arg173Pro interacciona más con matrices de mayor contenido sulfatado.