MÉTODO SIMPLE PARA LA DETERMINACIÓN DE CANNABINOIDES EN DIFERENTES MATRICES

F. GEIER; B. BUFFONE SCHAB; M.E. AMARILLO; E. YUFERA; O. ARANDA; I. GOMEZ; J.E. COLMAN LERNER

Buenos Aires

Congreso; XXXII Congreso Argentino de Química; 2019

Asociación Química Argentina

Se desarrolló un método simple y rápido para extracción y análisis mediantecromatografía gaseosa acoplada a espectrómetro de masas (CGMS, Perkin Elmer580) para la cuantificación del contenido de Δ9-Tetrahidrocannabinol (Δ9THC),Cannabidiol (CBD) y Cannabinol (CBN) en diferentes matrices: material vegetal, aceitey resinas. El procedimiento de extracción se realizó con metanol (10 mL, Baker gradoHPLC) a 500 mg de muestra (material vegetal, aceite o resina), asistido mediante bañoultrasónico durante 30 minutos, y posterior centrifugado a 10000 rpm 5 minutos, todaslas muestras fueron filtradas con filtro osmonic de Nylon de 0,22 micrones y 13mm dediámetro. A 1 mL del extracto obtenido se le realizó un procedimiento de clean up paraeliminar interferencias de la matriz con carbón grafitado y C18 asistido en bañoultrasónico por 30 minutos, y posterior centrifugación a 10000 rpm 5 minutos.Separado el sobrenadante se le realizo un lavado con metanol fresco (1 mL) al C18 ycarbón grafitado remanente para asegurar total extracción de los cannabinoides,asistido en baño ultrasónico por 30 minutos, y posterior centrifugación a 10000 rpm 5minutos. Se juntaron los extractos y se diluyo una alícuota del mismo en una relación1:10 para los extractos provenientes de muestras de aceite y material vegetal y en unarelación 1:1000 para muestras provenientes de resinas, para posterior análisis de lasmuestras por CGMS en modo SIR (single ion record) y cuantificación medianteestándar externo con curva de calibración en un rango entre 0,05mg/mL y 10mg/mL deTHC, CBD y CBN (Cerilliant).Se realizaron ensayos de recuperación a partir de estándares certificados (Cerilliant)por triplicado arrojando factores de recuperación (r) para THC de 0.919 (σ 1.10%),para CBD de 0.875 (σ 1.51 %) y para CBN (σ 1.40%) de 0.789. Se estimó el límite dedetección del método (LDM) mediante el método de 3 veces la desviación estándar delblanco (10 réplicas) obteniendo un valor de 0,40 μg/g para resina y material vegetal yde 0,37 μg/mL para aceites. Para los ensayos de recuperación y la determinación delLDM se utilizó aceite de oliva como blanco de muestras de aceites y ortiga (UrticaCannabina) como blanco del material vegetal, presentando la ortiga característicasmorfológicas parecidas a la Cannabis Sativa. A partir de la ortiga se procedió aobtener una resina mediante extracción en metanol seguida de evaporación delsolvente. Una vez optimizada la metodología se analizaron muestras de materialvegetal (71), aceite (144) y resinas (44), obteniendo una amplia variedad de resultadosen todas las matrices.En material vegetal se obtuvo una media de 137,4 mg/g de THC (2.6mg/g - 684.2mg/g), 35.3 mg/g de CBD (0.2 mg/g - 457,3 mg/g) y 11.0 mg/g de CN (0.9 mg/g - 67.8mg/g); en aceites una media de 14.3 mg/mL para THC (0.2 mg/mL - 285.9mg/mL),10.5 mg/mL de CBD (0.1mg/mL - 335.8 mg/mL) y resinas una media de 241.6 mg/g deTHC (9.6 mg/g -718.5 mg/g), 80.0 mg/g de CBD (0.4 mg/g - 487.5 mg/g) y 42.0 deCBN mg/g (3.1 mg/g -295.0 mg/g).Adicionalmente se identificaron mediante modo full SCAN otros cannabinoidespresentes en las muestras tales como: Cannabicromeno (CBC), Δ8-Tetrahidrocannabinol (Δ8THC) y Cannabigerol (CBG), sin poder realizar unacuantificación por la falta de estándares analíticos en el país.El método propuesto fue versátil, rápido y aplicable a los tres tipos de matrices con lascuales se trabaja habitualmente en Cannabis terapéutico (Material vegetal, resina yaceite). La amplia variabilidad de los resultados se debe a las diferentes formas decultivo, extracción y dilución en el aceite. También se pudo observar que la mismavariedad de planta pero cultivada de manera diferente cambia el perfil de susCannabinoides. Los aceites utilizados para administración vía oral es donde seencuentra la menor concentración de Cannabinoides.