Estudio conformacional de la lipasa de Candida antarctica B en solución en el curso de su adsorción en monocapa sobre TiO2

M. L. FORESTI; G. VALLE; M.L.FERREIRA; L.E. BRIAND

Bahía Blanca, Argentina

Jornada; III Encuentro de Física y Química de Superficies; 2007

La espectroscopía infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) es reconocida como una herramienta poderosa para el estudio de la estructura secundaria de proteínas. En particular, el análisis de la absorción de la banda amida I en la región de 1700 a 1600 cm-1, permite la obtención de información cuantitativa sobre la estructura conformacional de las proteínas. En el presente trabajo se estudia por técnicas de FTIR la evolución de la estructura secundaria de la lipasa de Candida antarctica B (CALB) en solución en el curso de su inmovilización sobre dióxido de titanio para la obtención de un biocatalizador en monocapa (CALB/ TiO2). A partir de la deconvolución de la banda amida I, se reportan en esta contribución los cambios registrados en la conformación de la lipasa a partir del contacto con el soporte de inmovilización. Dichos cambios se cuantifican a partir del aporte relativo de los distintos elementos que constituyen la estructura secundaria de la lipasa (hélices a, láminas b, estructuras no ordenadas, turns, etc). Los resultados obtenidos evidencian un cambio conformacional de la lipasa contactada con el soporte, detectándose una progresiva disminución del aporte de hélices a y láminas b (elementos mayoritarios en la lipasa en solución nativa), así como el crecimiento de la banda en 1620 cm-1 asociada con la formación de agregados intermoleculares producto del desdoblamiento y la agregación de proteínas. En cuanto al estudio del sólido obtenido, el trabajo se complementa con la caracterización  de CALB/TiO2 por técnicas de SEM, EDX, FTIR y AFM. La información obtenida a partir de los espectros infrarrojo del sólido se utiliza para inferir los grupos involucrados en la unión de la lipasa con el soporte. Por último, la contribución incluye el estudio de la interacción de la lipasa con el soporte por medio del modelado molecular del sistema, utilizando software específico (MM2 y PM3). Teniendo en cuenta los resultados de la espectroscopía infrarroja, se evalúa la aplicabilidad de un estudio conformacional de los aminoácidos de la proteína en interacción con distintos planos de dióxido de titanio.