CINDECA   05422
CENTRO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO EN CIENCIAS APLICADAS "DR. JORGE J. RONCO"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la composición y el contenido de lipasa de un caldo crudo comercial de CALB
Autor/es:
CARLOS R. LLERENA SUSTER; SUSANA MORCELLE DEL VALLE; LAURA E. BRIAND
Lugar:
La Plata
Reunión:
Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones V EnReBB; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biocatálisis y BIotransformaciones
Resumen:
La lipasa B de Candida antarctica (CALB) (EC 3.1.1.3) es una de las lipasas más ampliamente usadas en biocatálisis debido a que resulta muy activa ante una gran diversidad de sustratos. Además la CALB es estable en solventes orgánicos y puede catalizar reacciones incluso en altas temperaturas. Aunque para algunos procesos industriales en fase homogénea se pueden usar preparaciones crudas de CALB, resulta útil establecer una estrategia de purificación para la realización de distintos estudios o desarrollos. En este sentido, es útil purificar la enzima para poderla caracterizar bioquímicamente y estructuralmente o para realizar sobre la misma ingeniería genética. Por otra parte, a partir de la lipasa purificada es posible preparar biocatalizadores que, por un lado posean mejores rendimientos en las reacciones y, por otro, permitan determinar inequívocamente los cambios que pudieran ocurrir en la estructura secundaria y terciaria al inmovilizarla y/o ante la exposición a distintas condiciones de reacción. Estas relaciones fundamentales estructura enzimática-actividad catalítica tendientes al diseño racional de biocatalizadores solo pueden obtenerse con sistemas de composición bien conocida. En este sentido y como una primera etapa en el desarrollo de una metodología de purificación enzimática, se han investigado los componentes y el contenido real de enzima de un caldo crudo de CALB provisto por la empresa Novozymes. La estrategia empleada en esta investigación involucró primeramente la centrifugación del caldo crudo a 9600×g durante 30 minutos lo que permitió separar una fracción insoluble cuyo contenido es de 79,4 mg por cada 1 ml de caldo. El tratamiento del sobrenadante con sulfato de amonio condujo a la co-precipitación de proteínas y ácidos nucleicos según los análisis por electroforesis en agarosa y SDS-PAGE. En este sentido, los análisis por espectroscopia UV-Vis demostraron la presencia de compuestos con máximos de absorbancia cercanos a 260 nm. El contenido proteico del caldo crudo inicial es de 15,2 mg/ml que corresponde principalmente a CALB (33 kDa), según lo observado mediante análisis por SDS-PAGE. Dicha concentración se reduce hasta un 86 % luego de la separación de insolubles y hasta un 82 % luego de la precipitación con sulfato de amonio. En este contexto, se concluye que el caldo crudo contiene ácidos nucleicos y otras sustancias solubles (precipitables) en un contenido igual a 109,37 mg/ml.
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