Identificación de proteínas blanco de CaMKII en mitocondrias aisladas de corazón.

VALVERDE CA ; PELLON M; LANDONI M; COUTO A; MATTIAZZI A

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2010

Identificación de fosforilaciones CaMKII-dependientes en mitocondrias aisladas. Valverde CA, Pellon M, Landoni M, Couto A, Mattiazzi A. Centro de Investigaciones Cardiocasculares, FAc. de Cs. Médicas UNLP / CCT-CONICET La Plata. En nuestro laboratorio hemos descrito que la muerte inducida por isquemia/reperfusión (IR) es mediada por CaMKII a nivel del retículo sarcoplasmático (RS) con participación de las mitocondrias. No se sabe si proteínas mitocondriales fosforiladas por CaMKII son responsables de parte del este efecto deletéreo en la IR. La hipótesis es que el aumento del Ca2+ citosólico (activación de CaMKII) en la IR, podría fosforilar proteínas de las mitocondrias (además de las ya descritas del RS), por aumento en la [Ca2+] local y transferencia en el microdominio mitocondrias-RS. Esta fosforilación de proteínas mitocondriales podría alterar su función y contribuir al efecto deletéreo de la CaMKII en la IR. El trabajo propone identificar proteínas blanco de CaMKII a nivel mitocondrial/interacción con el RS. Para ello se realizó el aislamiento, purificación, caracterización de la misma y fosforilación in vitro (iv) con CaMKII y ATP radiactivo, de mitocondrias de corazón de rata. La fosforilación i.v. con 32P-ATP y la autorradiografía de geles indicó la fosforilación de proteínas blanco de CaMKII. La fosforilación i.v. en presencia de un inhibidor específico de CaMKII, se confirma la especificidad de 3 proteínas, resultando de interés una banda de ~20 kDa. Se están realizando estudios por EM para identificar dicha proteína. Estos resultados indicarían la presencia de proteínas mitocondriales fosforilables por CaMKII en corazón, quizás involucradas en el daño por IR.