Mecanismos que definen la restitución de la liberación de Ca2+ del retículo sarcoplasmático en miocitos cardiacos

FELICE, JUAN I; SAPIA, LUCIANA; NEGRONI, JORGE; CELY-ORTIZ, ALEJANDRA; FEDERICO, MARILÉN; LASCANO, ELENA; VALVERDE, CARLOS A.; PALOMEQUE, JULIETA; MATTIAZZI, ALICIA

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2019; 2019

Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Introducción:Durante el acoplamiento éxcito-contráctil, la entradade Ca2+ desde el espacio extracelular induce la liberación de Ca2+del retículo sarcoplasmático (RS) en un proceso denominado liberación de Ca2+inducida por Ca2+ (CICR). Este mecanismo de liberación necesita ciertotiempo entre estímulos sucesivos para restituirse y producir una segundaliberación de Ca2+ de igual magnitud a la anterior. Este fenómeno sedenomina Restitución de la Liberación deCa2+ (RLC) y ha sido propuesto como uno de los mayoresdeterminantes de la estabilidad de la CICR y su alteración ha sido asociada conarritmias ventriculares. Los factores que determinan la RLC no están claros, existiendoresultados controvertidos, principalmente con respecto al papel de la retoma deCa2+ del RS sobre el tiempo de RLC. Objetivos:Diseccionar los factores que definen la Restitución deLiberación de Ca2+ (RLC). Materiales ymétodos:Se realizaron experimentos en corazones y cardiomiocitosaislados de ratones de tipo salvaje (WT), ratones con una mayor recaptura de Ca2+por el RS (debido a la ablación de fosfolamban, una proteína inhibitoria de labomba Ca2+-ATPasa del RS, PLNKO), ratones con una mayor actividad delos receptores de rianodina (RyR2) del RS (debido a la pseudofosforilaciónconstitutiva del sitio fosforilable por CaMKII Ser2814, S2814D), y ratones con ambasalteraciones (SDKO) obtenidos por cruza entre S2814D y PLNKO.Se midió el Ca2+ intracelular mediante microscopiade fluorescencia y se realizaron protocolos de dos pulsos que arrojaron curvas quesirvieron para evaluar la RLC. En ellas se midió la constante de tiempo (Tau), asumiendouna relación exponencial entre el Ca2+ liberado y el tiempo entreestímulos. También se utilizó un modelo de cardiomiocito humano, previamentevalidado y utilizado en nuestro grupo, que representó cada condiciónexperimental y permitió realizar simulaciones del protocolo de RLC. Corazonesde cada cepa fueron también congelados para análisis por Western blot (WB). Resultados:Los experimentos indicaron que la RLC depende de lacarga de Ca2+ del RS (el aumento de Ca2+ del RSproducido por aumentar el Ca2+ extracelular de 2 a 4 mM en ratonesWT, produjo una disminución de Tau en 52%, p