Localizacion de la isoforma 1 del intercambidor Na+/H+(NHE1) en Mitocondrias

MORGAN PE, VILLA ABRILLE MC, CINGOLANI HE, ALVAREZ BV

Rosario, Santa Fe, Argentina

Congreso; XXVIII Congreso Nacional de Cardiologia; 2010

Federacion Argentina de Cardiologia

&amp;amp;amp;lt;!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:SimSun; panose-1:2 1 6 0 3 1 1 1 1 1; mso-font-alt:&amp;amp;amp;#23435;&amp;amp;amp;#20307;; mso-font-charset:134; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1 135135232 16 0 262144 0;} @font-face {font-family:"@SimSun"; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-charset:134; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1 135135232 16 0 262144 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:SimSun; mso-fareast-language:ZH-CN;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --&amp;amp;amp;gt; &amp;amp;lt;!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:SimSun; panose-1:2 1 6 0 3 1 1 1 1 1; mso-font-alt:&amp;amp;#23435;&amp;amp;#20307;; mso-font-charset:134; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1 135135232 16 0 262144 0;} @font-face {font-family:"@SimSun"; panose-1:0 0 0 0 0 0 0 0 0 0; mso-font-charset:134; mso-generic-font-family:auto; mso-font-format:other; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:1 135135232 16 0 262144 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:SimSun; mso-fareast-language:ZH-CN;} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --&amp;amp;gt; La inhibición de la isoforma 1 del intercambiador Na+/H+ (NHE) reduce los daños producido por isquemia/reperfusión (I/R), hipertrofia e insuficiencia cardíaca.  Los posibles mecanismos que explican estos efectos involucran el mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial, el enlentecimiento de la apertura del poro de transición mitocondrial, y la reducción de la producción de ión superoxido por la mitocondria. Por este motivo, estudiamos la expresión del NHE1 en mitocondrias aisladas de corazones de rata.  Detectamos la expresión del NHE1 mediante técnicas de immunoprecipitación seguida de análisis por immunoblots (Western Blot, WB). Se uso un RNA de interferencia capaz de silenciar el NHE1 (shNHE1) inyectado en la pared del miocardio de corazones de ratón o rata, libre o incorporado en lentivirus (LV), respectivamente.   Como controles fueron inyectados ratones con secuencias sin sentido o ratas con solución salina.  Despues de 48 h, shNHE1 redujo la expresión de NHE1 total en un 63±1% vs control (n=4, P<0.02 t-test), mediante WB. Luego de dos semanas, se examinó la expresión del NHE1 en lisados mitocondriales de ventrículos de rata tratadas mediante WB.  La inyección del LV-shNHE1 redujo la expresión del NHE1 en un 69±1% comparado con control (n= 4, P<0.05 t-test), confirmando la expresión del NHE1 en mitocondrias.  La expresión del NHE1 fue confirmada por microscopia electrónica, mediante la técnica de immunogold, mostrando la asociación del NHE1 con la membrana interna de la mitocondria. Immunocitoquímica combinada con microscopía confocal en miocitos ventriculares de rata mostró co-localización de NHE1 con citocromo C oxidasa, un marcador de mitocondrias.  Podemos concluír entonces que hemos demostrado por primera vez la expresión de la isoforma 1 del intercambiador Na+/H+ en mitocondrias.  Por lo tanto el NHE1 localizado en la mitocondria podría ser el responsable del efecto protector sobre patologías cardiacas mediado por inhibidores del NHE1.