LA DISMINUCION DE LA ACTIVIDAD DEL NHE-1 POR SILDENAFIL SE DEBE A UN AUMENTO DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA 1 (PP1).

YEVES, A.M,; GARCIARENA CD,; NOLLY MB,; CHIAPPE DE CINGOLANI GE,; PEREZ NG,; ENNIS IL,; CINGOLANI HE.

La Plata

Jornada; Jornadas de Medicina 2009; 2009

Facultad de Ciencias Médicas- Universidad Nacional de La Plata

TITULO La disminución de la actividad del NHE-1 por sildenafil (SIL) se debe al aumento de la actividad de la fosfatasa PP1. Autores: Yeves AM; Garciarena CD; Nolly MB; Chiappe de Cingolani GE; Pérez NG; Ennis IL, Cingolani HE. Lugar de Trabajo: Centro de Investigaciones Cardiovasculares, UNLP. CONICET-La Plata. e-mail de contacto (IMPORTANTE):alemy21@yahoo.com.ar Introducción: El intercambiador Na+/H+ (NHE-1) es una proteína integral de membrana que participa en la regulación del pHi del miocardio, debido a que cataliza el intercambio electroneutro de un H+ intracelular por un Na+ extracelular. El NHE-1 tiene un rol importante en el daño por isquemia y reperfusión y en el remodelamiento del miocardio después del infarto, ya que se le atribuye el aumento del Ca+2 intracelular a través de la activación del modo reverso del intercambiador Na+/Ca+2. Recientemente, nosotros demostramos que sildenafil (SIL, inhibidor de la fosfodiesterasa 5A, PDE5A) protege al corazón del remodelamiento postinfarto en ratas con oclusión de la arteria coronaria, y esta protección está asociada con inhibición del NHE-1. Objetivo: Determinar la vía de señalización intracelular por la cual la inhibición de PDE5A produce inhibición del NHE-1 en miocitos ventriculares aislados de gato. Materiales y métodos: Los miocitos ventriculares aislados de gato se cargaron con el indicador BCECF-AM para la determinación del pH intracelular (pHi). La actividad del NHE-1 (JH+, mmol/L/min) se determinó durante la recuperación del pHi luego de una carga ácida inducida por un prepulso de amonio, en ausencia de bicarbonato. Las intervenciones farmacológicas se realizaron a pHi 6.8. Por Western blot se determinó la fosforilación de las quinasas ERK1/2, p90RSK y del NHE-1. La fosforilación del NHE-1 se estimó usando un anticuerpo anti 14-3-3 que se une al sitio fosforilado Ser 703 del NHE-1. Los resultados se normalizaron con anticuerpos de las formas no fosforiladas de dichas quinasas y del NHE-1. Resultados: La inhibición de PDE5A con SIL (1 µmol/L) o EMD3605227/5 (0.1 µmol/L) disminuyó el JH+ de 2.15±0.18, n=10 (control) a 1.24±0.17,n=10 y a 1.31±0.16,n=6 (P<0.01) respectivamente. La inhibición de PKG con KT5823 (1 µmol/L) y de PP1 y PP2A con ácido okadaico (OKA) 100 nmol/L revirtió el efecto de SIL (JH: 2.13±0.27,n=12 y 2.97±0.39, n=10, respectivamente). Inhibiendo solamente la PP2A con OKA 1 nmol/L o endothall (inhibidor específico de PP2A, 100 µmol/L) no se modificó el efecto de SIL (1.34±0.21,n=12 y 0.94±0.16,n=10 respectivamente). La acidosis aumentó la fosforilación de ERK1/2, p90RSK y del NHE-1 (189±23 %,n=11, 187±17 %,n=11 y 128±9.5%, respectivamente, P<0.01 vs control). SIL no modificó la fosforilación de ERK1/2 y p90RSK (187±31 %,n=7, 201±30%,n=8, respectivamente), pero disminuyó la fosforilación del NHE1 (82±11.7%,n=8, P<0.01). Conclusiones: La inhibición de PDE5A disminuye la actividad del NHE1 por una disminución de su fosforilación probablemente por activación de PP1. El SIL podría ser de gran importancia terapéutica en las patologías del miocardio caracterizadas por un aumento de la actividad del NHE-1.