Mecanismos que definen la restitución de liberación de Ca2+ del retículo sarcoplásmico en miocitos cardíacos

CELY ORTIZ, ALEJANDRA; FEDERICO, MARILÉN; LASCANO, ELENA CATALINA; VALVERDE, CARLOS A; FELICE, JUAN IGNACIO; PALOMEQUE, JULIETA; SAPIA, LUCIANA; MATTIAZZI, ALICIA; NEGRONI, JORGE ANTONIO

LA PLATA

Jornada; Jornadas de Investigación UNLP 2019; 2019

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA - UNLP

Introducción: Durante el acoplamiento EC, la entrada de Ca2+ induce la liberación de Ca2+ desde el retículo sarcoplasmático (RS). Este mecanismo de liberación necesita tiempo entre estímulos para restituirse y producir una segunda liberación de Ca2+ de igual magnitud a la anterior, a lo que se denomina Restitución de Liberación de Ca2+ (RLC) que ha sido propuesto como uno de los mayores determinantes de la estabilidad de la CICR y su alteración ha sido asociada con arritmias ventriculares e insuficiencia cardiaca (IC). Los factores que determinan la RLC no están claros, presentando resultados controvertidos, principalmente con respecto al papel de la retoma de Ca2+ al RS en el tiempo de RLC.Objetivos: Diseccionar los factores que definen la Restitución de Liberación de Ca2+ (RLC) y ver el peso relativo de éstos.Materiales y métodos: Los experimentos se realizaron en corazones y cardiomiocitos aislados de ratones de tipo salvaje (WT), ratones con una mayor captura de Ca2+ en el RS (debido a la ablación de fosfolamban, PLNKO), ratones con una mayor actividad de los receptores de rianodina (RyR2) del RS (debido a la pseudofosforilación constitutiva de RyR2 -Ser2814 CaMKII sitio, S2814D), y ratones de doble mutación (SDKO) obtenidos por cruzamiento S2814D y PLNKO. Para el análisis del trabajo se midió el Ca2+ intracelular (citosólico y luminal) mediante microscopia de fluorescencia y realizando protocolo de dos pulsos se obtuvieron curvas de RLC y se estudió la constante de tiempo (Tau, suponiendo una relación exponencial entre el Ca2+ liberado y el tiempo entre estímulos). También se utilizó un modelo de cardiomiocitos humanos, previamente validado, que representaba cada condición experimental para realizar simulaciones del protocolo RLC. Los corazones de cada cepa se congelaron para el análisis de transferencia Western (WB).Resultados: El análisis de las curvas de RLC indicó que la RLC depende de la carga de Ca2+ del RS (aumento de SR Ca2+ al aumentar el Ca2+ extracelular de 2 a 4 mM en ratones WT, disminución de Tau en 52%, p