LA ESTABILIZACIÓN DEL RyR2 PREVIENE LA APOPTOSIS INDUCIDA EN SEPSIS.

CIOCCI PARDO ALEJANDRO; MOSCA SUSANA; PETROFF, MARTÍN VILA; SEPÚLVEDA MARISA; GONZÁLEZ ARBELAEZ LUISA F

Mendoza

Congreso; XXXVI Congreso Nacional de Cardiología-FAC; 2018

Federación Argentina de Cardiología

Sepsis es una respuesta inflamatoria sistémica asociada a una infección severa que cursa con la pérdida de cardiomiocitos por apoptosis, lo cual contribuye a la falla cardíaca. Previamente demostramos que la proteína quinasa dependiente de calcio y calmodulina tipo II (CaMKII) promueve disfunción contráctil al fosforilar el receptor de rianodina (RyR2) en el sitio Ser2814 dependiente de CaMKII induciendo un aumento en su probabilidad de apertura y como consecuencia la pérdida de Ca2+ por el retículo sarcoplasmático (RS). Las alteraciones en la regulación de Ca2+ por el RS podrían jugar un rol importante en la apoptosis. Sin embargo, los mecanismos subcelulares que median la apoptosis en sepsis todavía no están completamente dilucidados.Objetivo: examinar si la apoptosis asociada con sepsis es mediada por alteraciones en la función del RyR2 dependientes de CaMKII. Material y Métodos: utilizamos un modelo experimental de sepsis denominado CASP (peritonitis provocada por colocación de una cánula en el colon ascendente) y sus controles con la cirugía simulada denominada Sham, en ratones silvestres WT, mutantes S2814A que tienen el sitio de fosforilación CaMKII-dependiente mutado a alanina y por lo tanto no fosforilable y transgénicos AC3-I que poseen un péptido inhibidor específico de CaMKII y su control AC3-C. Se evaluó apoptosis por Western blot: Bax/Bcl2; CitoC y potencial de membrana mitocondrial. Los experimentos fueron llevados a cabo en cardiomiocitos aislados, corazón entero y mitocondrias aisladas.Resultados: observamos que en corazones de ratones CASP WT la relación de las proteínas pro y anti-apoptóticas Bax/Bcl2 aumenta (CASP WT 2,6±0,42 vs. Sham WT 0,6±0,08 P≤ 0,05) y el contenido de citocromo C disminuye significativamente con respecto a los Sham WT indicando un aumento de apoptosis por vía mitocondrial en sepsis. Por otro lado, evaluamos el grado de despolarización de la membrana interna mitocondrial ya que, la despolarización de esta membrana puede ser inducida por una serie de factores, incluyendo la sobrecarga de Ca2+ y observamos que el potencial de membrana mitocondrial (Δψm) de ratones CASP WT fue significativamente menor que los ratones Sham WT (CASP WT -124,3±4,49 vs. Sham WT -165,3±8,56 P≤0,001).Para examinar si la fosforilación del RyR2 por CaMKII media la apoptosis asociada con sepsis, evaluamos apoptosis en corazones de ratones mutantes S2814A CASP y Sham. Observamos que los corazones de ratones S2814A CASP no tenían aumentados los índices apoptóticos con respecto a los Sham. Finalmente, para confirmar si los RyR2 están involucrados en la apoptosis examinamos si la reducción en la probabilidad de apertura del RyR2 previene la apoptosis inducida por sepsis. Para estabilizar a los RyR2 utilizamos dantrolene, un compuesto conocido por disminuir la probabilidad de apertura del RyR2. El tratamiento con dantrolene en ratones CASP WT previno la apoptosis. Estos resultados indican que los RyR2, posiblemente a través del aumento en la pérdida de Ca2+ del RS y la consecuente sobrecarga de Ca2+ mitocondrial, estarían funcionalmente implicados en la apoptosis inducida por sepsis.Concluimos que la fosforilación del RyR2 por CaMKII resulta en una pérdida de Ca2+ del RS provocando la sobrecarga de Ca2+ mitocondrial gatillando así la cascada apoptótica en sepsis. Especulamos que los estabilizadores del RyR2 podrían resultar en una potencial herramienta terapéutica para reducir la disfunción contráctil y la apoptosis asociada con sepsis.