Restitución de la liberación de Calcio por el retículo sarcoplasmático en el corazón intacto. Disección de los factores que la modifican

FELICE, JUAN IGNACIO; NEGRONI, JORGE ANTONIO; VALVERDE, CARLOS ALFREDO; LASCANO, ELENA CATALINA; MAZZOCCHI, GABRIELA; PALOMEQUE, JULIETA; MATTIAZZI, RAMONA ALICIA

La Plata, Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2016

Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS)

Durante el acoplamiento éxcito-contráctilse libera calcio (Ca2+) desde el retículo sarcoplasmático (RS), enrespuesta a una entrada de Ca2+ por el sarcolema. Luego de laliberación, debe transcurrir un tiempo, antes de que ocurra una segundaliberación de igual amplitud (restitución de la liberación de Ca2+, RLC).La RLC es importante ya que es causa fundamental en el desarrollo de arritmias.Si bien los mecanismos que la determinan y regulan no están totalmenteaclarados, se demostró que una mayor actividad de la SERCA aumenta la velocidadde RLC. Además en ratones carentes de calsecuestrina, el buffer de Ca2+ principal del RS, se acelera la RLC,posiblemente por aumento del Ca2+ libre dentro del RS.  La mayoría de estos estudios se han realizadoen miocitos aislados. En el presente trabajo estudiamos la RLC en ratones mutantescon el objetivo de su mejor caracterización en el corazón intacto y de disecarlos distintos mecanismos (velocidad de secuestro de Ca2+, contenidode Ca2+ del RS, sensibilidad al Ca2+ de los RyR2), quepueden regularla. Realizamos experimentos en corazones de ratones controles(WT), con ablación de fosfolamban, proteína que cuando está presente inhibe elsecuestro de Ca2+ por el RS (PLNKO), con seudofosforilaciónconstitutiva del RyR2 por CaMKII (S2814D), alteración que aumenta la pérdida deCa2+ por el RS, y doble mutantes (SDKO), resultado de la cruza de ambos.Se midió Ca2+ citosólico e intra RS con indicadores fluorescentes,usando la técnica de microscopía de campo local pulsado, y potenciales detransmembrana con microelectrodos. Las curvas de RLC indicaron las siguientes constantesde tiempo: WT: 75,0±7,1 ms, S2814D: 98,6±6,8 ms, PLNKO: 27,6±5,3ms y SDKO: 41,1±2,1 ms.  Lacomparación entre SDKO y PLNKO reveló que para una velocidad del secuestro de Ca2+similar, tanto medida en el RS como en el citosol, el contenido de Ca2+del RS, estimado en miocitos aislados a travésde pulsos de cafeína, fue menor en los SDKO respecto a los PLNKO (42,2±5,3vs 65,6±11,0%F/F0 respectivamente, p<0,05). Por otra parte, losSDKO, con igual contenido de Ca2+ del RS que los WT, revelaron unaRLC significativamente más veloz. Los resultados sugieren que el contenido de Ca2+del RS y no la velocidad de secuestro de Ca2+, y lasensibilidad del RyR2 al Ca2+ son determinantes principales de la RLC.Estos datos fueron además interpretados mediante un modelo matemático.