Restitución de la liberación de Ca2+ por el retículo sarcoplasmático en el corazón intacto. Disección de los factores que la modifican

MAZZOCCHI G; PALOMEQUE J; NEGRONI JA; FELICE J; VALVERDE CA; LASCANO EC; SOMMESE L; MATTIAZZI A

La Plata

Congreso; Reunión Anual SAFIS 2016; 2016

Sociedad Argentina de Fisiología

Durante el acoplamientoéxito-contráctil se libera calcio (Ca2+) desde el retículosarcoplasmático (RS), en respuesta a una entrada de Ca2+ por elsarcolema. Luego de la liberación, debe transcurrir un tiempo, antes de que ocurrauna segunda liberación de igual amplitud (restitución de la liberación de Ca2+,RLC). La RLC es importante ya que es causa fundamental en el desarrollo dearritmias. Si bien los mecanismos que la determinan y regulan no estántotalmente aclarados, se demostró que una mayor actividad de la SERCA aumentala velocidad de RLC. Además en ratones carentes de calsecuestrina, el buffer deCa2+ principal del RS, se acelera la RLC, posiblemente por aumentodel Ca2+ libre dentro del RS. La mayoría de estos estudios se han realizado en miocitos aislados. Enel presente trabajo estudiamos la RLC en ratones mutantes con el objetivo de sumejor caracterización en el corazón intacto y de disecar la importancia de lavelocidad del secuestro de Ca y del contenido de Ca del RS en la regulación dela RLC. Realizamos experimentos en corazones de ratones controles (WT), conablación de fosfolamban, proteína que cuando está presente inhibe el secuestrode Ca2+ por el RS (PLNKO), con seudofosforilación constitutiva delRyR2 por CaMKII (S2814D), alteración que aumenta la pérdida de Ca2+por el RS, y doble mutantes (SDKO), resultado de la cruza de ambos. Se midió Ca2+citosólico e intra RS con indicadores fluorescentes, usando la técnica demicroscopía de campo local pulsado, y potenciales de transmembrana conmicroelectrodos. Las curvas de RLC indicaron las siguientes constantes detiempo: WT: 75,0±7,1 ms, S2814D: 98,6±6,8 ms, PLNKO: 27,6±5,3 ms y SDKO:41,1±2,1 ms.  Para disecar el posiblemecanismo involucrado, se compararon SDKO y PLNKO con igual velocidad delsecuestro de Ca por el RS, medida tanto en el RS como en el citosol. Elcontenido de Ca2+ del RS, estimado en miocitos aislados a través depulsos de cafeína, fue menor en los SDKO respecto a los PLNKO (42,2±5,3 vs65,6±11,0 %F/F0 respectivamente, p<0,05). Los resultados permitieroncaracterizar las RLC en el corazón intacto y  sugieren que el contenido de Ca2+del RS y no la velocidad de secuestro de Ca2+ es una determinante principalde la RLC. No podemos descartar la importancia de la fosforilación del RyR2 enla velocidad de la RLC. Estos datos fueron además interpretados mediante unmodelo matemático.