LA INHIBICIÓN DE CAMKII PREVIENE LA DISFUNCIÓN CONTRÁCTIL ASOCIADA CON SEPSIS.

MARISA SEPULVEDA; LUIS GONANO; MANUEL VIOTTI; MARTIN G. VILA PETROFF

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Soc. Arg. de Inv. Clínica (SAIC) - Reunión Anual de la Soc. Arg. de Fisiología (SAFIS); 2015

Sepsis, el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica a la infección severa. La disfunción contráctil inducida por sepsis es una complicación común en pacientes sépticos hospitalizados en terapia intensiva. A pesar de la reconocida asociación entre disfunción cardiaca y mortalidad en sepsis los mecanismos que subyacen a la disfunción contráctil asociada con sepsis no han sido completamente dilucidados. Estudios recientes indican que la disfunción contráctil asociada con sepsis se debería a una disminución en la amplitud del transitorio de Ca++ intracelular, a la pérdida Ca++ del RS por los canales de rianodina (RyR2) y también al aumento de los niveles de las especies reactivas de oxígeno (ROS). Por otra parte, la CaMKII es una quinasa ubicua, canónicamente activada por Ca++ que en el corazón, normalmente cumple una función fisiológica regulando el acoplamiento éxito-contráctil. Recientemente numerosos trabajos han destacado que la activación crónica de esta quinasa puede ser deletérea y han atribuido, al menos en parte, a sus efectos sobre el RyR2. Por otro lado, los niveles elevados de ROS causan una modificación oxidativa de CaMKII que podría activar a esta quinasa. Esta activación modula a través de la fosforilación a los RyR2.Evaluaremos si la activación de CaMKII por oxidación aumenta la probabilidad de apertura del RyR2 resultando en la pérdida de Ca++ del RS, contribuyendo así a la disfunción contráctil asociada con sepsis.El modelo experimental de sepsis se denominada CASP (peritonitis provocada por colocación de una cánula en el colon ascendente) y se utilizaron ratones silvestres (C57), transgénicos AC3-I, que expresan un péptido inhibidor de la CaMKII, y su par control, que expresan un péptido inactivo, los AC3-C; y mutantes S2814a que tienen el sitio de fosforilación específico de CaMKII mutado.Luego de 24 horas de la operación CASP el crecimiento de colonias bacterianas aumentó significativamente con respecto a ratones con operación simulada (Sham) n=11 p < 0,05.Los datos ecocardiográficos para evaluar función ventricular, luego de 24 horas de la cirugía, indicaron que los ratones CASP presentan disfunción contráctil, n=5 p < 0,05.Observamos que CaMKII aumenta significativamente su actividad por oxidación en ratones CASP en comparación con ratones Sham, n=7 p < 0,05. Del mismo modo, la fosforilación del RyR2 en el sitio Ser2814 dependiente de CaMKII aumentó significativamente en corazones sépticos, n=7 p < 0,05. Confirmando que la activación de CaMKII en sepsis es mediada por oxidación, no observamos aumentos en su estado oxidado en ratones sépticos tratados con el antioxidante Tempol, n=5 p < 0,05.Los cardiomiocitos sépticos incubados con el inhibidor de CaMKII, KN93, los de los ratones trangénicos, AC3-I y los de ratones mutantes, S2814a preservaron su función contráctil luego de la cirugía CASP, n=7 por cada grupo p < 0,05. La utilización de herramientas farmacológicas y manipulación genética nos permiten reconocer el rol de CaMKII y la consecuente alteración del RyR2 en la disfunción contráctil asociada a sepsis.