La CaMKII activa al intercambiador Na+/H+ y contribuye a la recuperación pHi de una carga ácida en miocitos aislados de rata

VILA PETROFF MG; MUNDIÑA-WEILENMANN CB; HUERGO MA; MATTIAZZI A

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Sociedad Argentina de Fisiología; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Sociedad Argentina de Fisiología

Trabajos recientes indican que el aumento de la actividad del intercambiador Na+/H+ (NHE) en respuesta a una acidosis intracelular se debe a la interacción del H+ con su sitio alostérico y a su fosforilación por quinasas activadas por mitógenos. Por otra parte, en experimentos previos demostramos que la recuperación de la contractilidad durante la acidosis depende de la activación de la quinasa dependiente de Ca2+ y calmodulina tipo II (CaMKII). Sin embargo, el impacto de esta quinasa sobre la actividad del NHE y la recuperación del pHi no ha sido establecido. En este estudio examinamos si la CaMKII activa al NHE y contribuye a la recuperación del pHi luego de una carga ácida. Con este propósito, sometimos cardiomiocitos de rata cargados con el indicador fluorescente de pHi, SNARF-1/AM, a una acidosis intracelular generada por: 1) un pulso de ClNH4 y su posterior lavado (n=6) 2) el cambio de una solución HEPES por otra amortiguada con CO3HNa y equilibrada con 5% CO2-95% O2 (BIC), al mismo pHo de 7,4 (n=5) y 3) hipercapnia a pHo constante, inducida por cambio de la solución BIC por otra similar pero equilibrada con 20% CO2-80% O2 y con mayor [CO3HNa] para mantener el pHo en 7,4 (n=4), realizado en presencia de SITS, inhibidor del cotransporte Na+/CO3H- también alcalinizante. La velocidad de recuperación del pHi (dpHi/dt (min-1)), utilizada como indicador de la actividad del NHE, se midió en ausencia (control) y presencia de 1 microM KN- 93, un inhibidor de la CaMKII, y fue para 1) 0,17±0,03 y 0,06±0,01*; para 2) 0,09±0,02 y 0,03±0,02*; y para 3) 0,12±0,03 y 0,03±0,02*. Resultados similares se obtuvieron usando 2,5 microM AIP, un inhibidor más específico de la CaMKII. Estos resultados demuestran que la CaMKII regula la actividad del NHE y contribuye a la recuperación del pHi durante una carga ácida. Este mecanismo podría participar en la recuperación mecánica espontánea que se presenta en la acidosis. * p<0.05 vs. control.