CIC   05421
CENTRO DE INVESTIGACIONES CARDIOVASCULARES "DR. HORACIO EUGENIO CINGOLANI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Silenciamiento génico intramiocárdico mediante la utilización de vectores lentivirales
Autor/es:
BREA MS; PEREZ NG; MORGAN PE
Lugar:
Bariloche
Reunión:
Congreso; XLIII Congreso Argentino de Genética - IV Reunión Regional SAG-La Pampa Patagonia; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Genética
Resumen:
Evidencias experimentales sugieren que la activación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) sería clave en el desarrollo de hipertrofia cardíaca patológica, de modo que el silenciamiento de su expresión podría ser de suma utilidad para el tratamiento de esta patología. Con la idea de desarrollar una herramienta específica para inhibir al EGFR miocárdico, nos propusimos producir un lentivirus de 3ra generación portador de un RNA de interferencia anti-EGFR para su uso in vitro e in vivo. Para la producción del virus se transfectaron células HEK 293T con los vectores empaquetadores y el vector silenciador y se recolectó el medio de cultivo por 72 horas. El virus (que porta el gen reportero que codifica para la proteína fluorescente roja) fue concentrado por ultracentrifugación, y se calculó su título a partir de la transducción de células HEK con diluciones seriadas, y posterior conteo de células fluorescentes. El título obtenido fue de 1x108 TU/ml. Inicialmente, la capacidad silenciadora del virus se comprobó por transfección de células HEK con un plásmido codificante para EGFR-GFP y su posterior transducción con el virus, observándose disminución de fluorescencia verde en simultáneo con aumento de la roja. Por último, para validar in vivo la efectividad de la técnica, se inyectó el lentivirus (o solución fisiológica como control) directamente en el miocardio de ratas Wistar. Un mes después de la inyección se comprobó por western blots en homogenatos de ventrículo izquierdo una reducción significativa del EGFR en las ratas inyectadas con virus vs. control.
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