S-nitrosilación y S-glutationilación del receptor de rianodina (RyR2) como mecanismos protectores de las arritmias de reperfusión

HERRERO A; BECERRA R. ; ROMÁN B.; MATTIAZZI A. ; SANCHEZ G. ; DONOSO P; MUNDIÑA-WEILENMANN C; VITTONE L; SAID M

Rosario, Santa fé

Congreso; XXXI Congreso Nacional de Cardiología; 2013

Federación Argentina de Cardiología

En trabajos previos (Said y col. JMCC 51, 2011) demostramos que durante la injuria por isquemia (I) y reperfusión (R) se activa la proteína quinasa dependiente de Ca2+ y calmodulina (CaMKII) generando su autofosforilación y la fosforilación de otros sustratos como el residuo Ser2815 del canal liberador de Ca2+ del retículo sarcoplasmático, receptor de rianodina (RyR2), siendo esto un mecanismo proarritmogénico. Modificaciones inducidas por especies reactivas de oxígeno y nitrógeno, como la S-glutationilación y la S-nitrosilación del RyR2 y la oxidación de CaMKII, también regulan la actividad de éstas proteínas. Nuestro interés se centró en conocer cuáles de estas modificaciones del estado redox, afectan RyR2 y CaMKII durante la R miocárdica y si se asocian con la aparición de las arritmias. Corazones de rata se perfundieron por la técnica de Langendorff y sometieron a isquemia global seguida de reperfusión (20/3min) a 37ºC. La medición de los potenciales de acción monofásicos y de la presión desarrollada por el ventrículo izquierdo permitió cuantificar la aparición de latidos prematuros (LP) durante los 3 primeros minutos de R frente a las distintas intervenciones. Los experimentos se realizaron en presencia y ausencia de inhibidores de la óxido nítrico sintasa (L-NAME 100mM) y de la NADPH oxidasa (Apocinina 10mM, APO). Para la inmunodetección de los cambios redox en RyR2 y CaMKII, los corazones fueron congelados a distintos tiempos durante el protocolo. Los resultados muestran a R1min un aumento significativo de 1) la S-nitrosilación del RyR2 (1.0±0.1 Preisquemia vs 2.3±0.3 U.A. R1min, n=8), 2) la S-glutationilación del RyR2 (1.0±0.1 Preisquemia vs 2.0±0.4 U.A. R1min n=11), 3) la oxidación de CaMKII (100±2.9 Preischemia vs 120.7±.8.6%  R1min n=6), 4) las arritmias (3±1 Preisquemia vs 45±4 LP R1min n=14) (p<0.05 en todos los casos). El tratamiento de los corazones con L-NAME y APO disminuyó los niveles de S-nitrosilación (1.2±0.1 R1min p<0.05) y S-glutationilación del RyR2 (0.8±0.1 R1min p<0.05) y produjo un aumento significativo del número de LP hasta 65±6 n=5 y 58±3 respectivamente (p<0.05). Los resultados indican que estas modificaciones redox del RyR2 podrían jugar un rol protector para las arritmias inducidas por reperfusión. Desentrañar los mecanismos que conducen a estas modificaciones sería clave para el diseño de nuevas estrategias terapéuticas.