Desarrollo de un RNA de interferencia contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico

BREA M SOLEDAD, NG PÉREZ, PE MORGAN

Salta

Congreso; Congreso Argentino de Genetica; 2013

La hipertrofia cardíaca (HC) es un factor de riesgo per se de enfermedad y muerte de origen cardiovascular. El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) está involucrado en una de las rutas pro-hipertróficas. En el corazón se encuentran expresados tres de los cuatro miembros de la familia del EGFR: ErbB1, ErbB2 y ErbB4. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un RNA de interferencia (RNAi) contra el ErbB1, que pueda ser utilizado para investigar su rol en la HC y como eventual terapia génica. A través de una búsqueda informática se eligió una secuencia específica del ErbB1 para formar el RNAi, que luego fue clonado mediante el uso de enzimas de restricción en un plásmido vector lentiviral, que presentalos genes de resistencia a ampicilina y de la proteína fluorescente roja. Se transformaron bacterias E. coli DH5-¦Á con el plásmido portador de la secuencia codificante para el RNAi, se aisló el DNA plasmídico y se analizó la naturaleza del producto obtenido mediante ensayos de PCR, digestión enzimática y transfección de células HEK 293T. Las bacterias transformadas crecieron en placas con medio suplementado con ampicilina, las reacciones de PCR realizadas utilizando primers específicos del RNAi dieron las bandas esperadas, y la digestión enzimática produjo el patrón de fragmentos esperado. Por último, las células HEK transfectadas mostraron la fluorescencia roja correspondiente, indicando la presencia del vector con el RNAi. Estos resultados sugieren haber obtenido el plásmido con el transgen shRNA-ErbB1 que permite sintetizar el lentivirus correspondiente.