El transporte de bicarbonato acoplado al sodio de neutrófilos humanos es mediado por el cotransportador Na+/HCO3- electroneutro NBCn1

CIANCIO MC; GIAMBELLUCA MS; ORLOWSKI A; GENDE OA; AIELLO EA

Mar del Plata

Congreso; Reunión Científica Anual 2011 de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2011

Sociedad Argentina de Fisiología-SAIC

Recientemente describimos la presencia en neutrófilos humanos de un transportador de bicarbonato alcalinizante que, conjuntamente con el conocido intercambiador Na+/H+ (NHE), contribuye con el control del pH intracelular (pHi). El objetivo del presente trabajo fue identificar y caracterizar este transportador. Se utilizaron neutrófilos humanos cargados con el indicador fluorescente BCECF para medir los cambios del pHi. El pHi basal (7.19±0.07, n=4) no se modificó significativamente cuando se adicionó EIPA , bloqueante del NHE  o S0859, bloqueante selectivo del cotransportador Na+/HCO3- (NBC). Sin embargo, cuando en la presencia continua de EIPA, se adicionó S0859 el pHi basal disminuyó significativamente (7.12±0.06, n=4, p<0.05), indicando que ambos transportadores, el NHE y el NBC, son necesarios para mantener el pH basal en éstas células. Se han descripto al menos tres isoformas de los NBC humanos, dos electrogénicas, NBCe1 y NBCe2 (1 Na+:2 ó 3 HCO3-) y uno electroneutra, NBCn1 (1 Na+:1HCO3-). Con el objetivo de identificar la isoforma del NBC involucrada en el mantenimiento del pHi de estás células, se despolarizó el potencial de membrana aumentando la concentración potasio extracelular desde 5 a 45 mM, y se comparó la recuperación de la acidosis inducida por un pulso de amonio en la constante presencia de EIPA. La despolarización no modificó la recuperación de la acidosis mediada por el NBC (DpHi/5 min= 0.077±0.006, n=6, en [ K+]=5 mM vs. 0.093±0.016, n=6, en [K+]=45mM), sugiriendo que el transporte  no es electrogénico. Con el objetivo de confirmar esta hipótesis se trataron neutrófilos con anticuerpos contra las tres isoformas en experimentos de microscopía confocal, observándose señal únicamente con el anticuerpo contra el transportador electroneutro. Los resultados del presente trabajo nos permiten concluir la isoforma que regula el pHi de los neutrófilos humanos es NBCn1.