El transporte de bicarbonato endógeno de las células de riñón embrionarias HEK293 es mediado por el cotransporte Na+/HCO3- electroneutro (NBCn1) y es modulado por la concentración de CO2

ORLOWSKI A; ALVAREZ BV; AIELLO EA

Mar del Plata

Congreso; Reunión Científica Anual 2011 de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2011

Sociedad Argentina de Fisiología-SAIC.

La línea celular HEK293 es utilizada como un sistema de expresión para el estudio de transportadores de membrana. Cuando no son transfectadas, se encuentra una actividad alcalinizante endógena atribuida a la presencia del intercambiador Na+/H+ (NHE). Sin embargo, en presencia de bloqueo del NHE persiste un mecanismo alcalinizante mediado por bicarbonato. El cotransporte Na+/HCO3- (NBC) regula el pHi en una amplia variedad de tejidos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el transporte dependiente de HCO3- y su regulación por CO2. Células HEK293 cultivadas al 5% CO2 fueron cargadas con el indicador sensible a pH, BCECF-AM. Las células se  acidificaron con un prepulso de NH4+ y se calculó la velocidad máxima de recuperación del pHi luego de bloquear al NHE con EIPA (Vi, [DpH/s]). Se halló una recuperación insensible a EIPA (Control= 0.20±0.01, n=21; EIPA= 0.083±0.008, n=14), que fue totalmente abolida en presencia de S0859, un inhibidor selectivo del NBC, (EIPA+S0859= -0.0014±0.003, n=4), como así también cuando se utilizó un medio con EIPA y sin Na+ o sin HCO3-, (s/Na+= 0.009±0.005, n=4; HEPES= -0.023±0.02), indicando la existencia de un mecanismo alcalinizante dependiente de Na+ y HCO3-. Se identificó la isoforma de NBC involucrada en estos efectos mediante Western-Blot utilizando anticuerpos específicos para las isoformas NBCe1, NBCe2 y NBCn1, hallándose únicamente una banda correspondiente a NBCn1. Se estudió la regulación por CO2 cultivando las células en una atmósfera al 10% de CO2 por 24 horas, luego se midió la expresión y la actividad del NBCn1. Se obtuvo un incremento significativo en la expresión (5%= 0.11±0.02, n=4; 10%= 0.34±0.03, n=4) correlacionado con el aumento de la actividad en presencia de EIPA (5%= 0.08±0.01, n=4; 10%= 0.22±0.01, n=4). Concluimos que en las células embrionarias de riñón humano el NBCn1 participa del control del pHi y además se encuentra regulado positivamente por la concentración de CO2 del medio.